英格恩生物技术博客 生物实验干货分享

下面把你给的条件先“翻译”成关键参数，方便对症下药： 细胞：CHO-K1，约 1×10^7 cells/mL； 杯子：0.4 cm 间隙； 脉冲：方波，300 V，20 ms，1 次脉冲（相当于 750 V/cm）； DNA：20 μg 质粒； 结果：存活率 95%，转染效率 30%； 另外：细胞和电转杯在冰上，未回温到室温就电转。 一、效率偏低的主要可疑点 …

根据你的描述，GFP在第一天有很好的表达，但在第二天转染DNA质粒后，第三天绿色荧光消失，只有少数细胞有红色荧光。这可能涉及到几个不同的因素： 1. DNA质粒表达对GFP表达的抑制 高浓度DNA引起的翻译抑制：你已经电转过mRNA，然后再转DNA质粒，这可能引发细胞对大分子DNA的免疫反应，比如激活干扰素反应。这可能抑制了翻译，不仅影响红色荧光蛋白（DNA …

文献标题 PD-1 silencing impairs the anti-tumor function of chimeric antigen receptor modified T cells by inhibiting proliferation activity 影响因子 8.676（Journal for ImmunoTherapy of Cance …

一般原则： 1.转染试剂对细胞有毒性。因此通常会建议在 4–6小时后更换新鲜培养基，以减轻毒性，保证细胞状态。 2.换液是否影响转染效率？ 针对你要拍荧光观察转染效率的情况： 如果只是想观察转染效率，一般建议 不要太早换液，至少等到荧光信号开始显现（通常24–48小时）再拍照。 如果细胞状态不好（明显发黄、漂浮、死亡增加），建议在 4–6小时换液，以保证细胞 …