英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
可以，但得分情况来看： 如果质粒是线性化了（即被酶切成线状DNA）： 可以电转，但是效率明显低于超级螺旋质粒（超螺旋 plasmid，通常是未切割、天然状态下的质粒结构）。 线性质粒在细胞内容易被核酸酶降解，稳定性和转化成功率比超螺旋质粒低很多。 有些时候，比如做基因组编辑（CRISPR knock-in）、整合型表达载体（需要基因组插入时），反而故意使用线 …
阅读更多 »BHK-21细胞的电转染条件是什么？
使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时BHK-21细胞的电转染条件是：对于0.2 cm电转杯，细胞密度为10×10^6 cells/ml，DNA用量为2μg，电转液体积为100μl，电压为150V， 电容为950μF。对于0.4 cm电转杯，细胞密度为10×10^6 cells/ml，DNA用量为5μg，电转液体积为25 …
阅读更多 »Hela细胞的电转染条件是什么？
使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时Hela细胞的电转染条件是： 对于0.2 cm电转杯，细胞密度为3×10^6 cells/ml，DNA用量为2μg，电转液体积为100μl，电压为130V， 电容为950μF。 对于0.4 cm电转杯，细胞密度为3×10^6 cells/ml，DNA用量为5μg，电转液体积为250μ …
阅读更多 »电转效率受哪些因素影响？
电穿孔效率受以下几种因素的影响： 外加电场的强度。电压过低，培养细胞质膜的改变不足以允许DNA 通过； 电压过高，细胞会受到不可逆的损伤。对于大多数哺乳动物细胞系， 电压250~ 500V/cm时可达到最高瞬时表达水平。通常经过电穿孔， 20% ～ 50％的细胞能够存活（根据台盼蓝拒染法的检测结果） ( Patterson 1979; Baum et al. …
阅读更多 »电穿孔转化感受态E.coli TG1细胞的制备
一、材料和试剂 恒温旋转式摇床 三角烧瓶（容量为1或2L） 50ml灭菌离心管 低温高速离心机 SB培养基 细菌培养用胰化蛋白胨 20g 细菌培养用酵母提取物 5g NaCl 0.5g 去离子水 950ml 250mmol/L KCl溶液 10ml 以5N …
阅读更多 »电转染后细胞孵育时间是多少？
每种细胞类型电转染后有最佳孵育时间。对于质粒的电转染，最佳孵育时间一般为12-48小时，具体最佳时间需根据实验目的、质粒性质和表达蛋白的半衰期进行调整。 如需了解更多关于电转染试剂的信息，请点击https://www.engreen.com.cn/efficient-electroporation
阅读更多 »电转染实验时，细胞密度是多少合适？
进行电穿孔实验时.，需确定每种细胞类型的最佳细胞密度，以使电穿孔效率最大化。对于Entranster-E电转染试剂来说，在含电转试剂的终体系中，电穿孔时的细胞密度一般在1-10×106细胞/ml范围内。对于悬浮细胞，最好是接近10×106细胞/ml的高细胞密度。对于贴壁细胞，建议的细胞密度为1-5×106 …
阅读更多 »电转染实验时，DNA有什么要求？
使用Entranster-E电转染试剂进行电转染实验时，应使用高纯度、无菌和无污染的DNA进行电穿孔实验。质粒DNA要求无内毒素，OD值为1.8-2.0。不建议使用微型试剂盒制备DNA，因为它可能含有高水平的内毒素。 不要使用仅用乙醇沉淀法纯化的DNA …
阅读更多 »如何做好细胞电转染实验？
要想做好细胞的电转染实验，应注意以下几点： 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择合适的细胞 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内 …
阅读更多 »大肠杆菌电转后，4度涂抹到培养基板子上会导致死亡吗？细菌电转后是不是比细胞还脆弱啊？
这个问题问得很实际，也很关键，特别是在做质粒转化实验的时候容易遇到。 回答一：大肠杆菌电转后，4℃下操作是否会导致死亡？ 不会直接导致大面积死亡，但确实会影响转化效率。 电转后的大肠杆菌处于一种“受伤”的状态，细胞膜被电击短暂打破，虽然迅速恢复，但暂时很脆弱。 如果在电转后没有及时给予复苏（比如在SOC、LB等液体培养基中摇床复苏30–60分钟），就直接在低 …
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