英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
病毒感染增强剂envirus使用中常出现的问题及解决方案如下：
阅读更多 »病毒转染原理及步骤
病毒转染原理及步骤 在细胞相关的实验操作中，对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞，通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率，以达到目的基因的高效瞬时表达。 病毒转染包括以下步骤：1构建载体 2包装提纯病毒 3感染靶细胞。以慢病毒为例。 慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起 …
阅读更多 »同样是慢病毒感染，为什么你的感染效率那么低？
在慢病毒感染细胞过程中，会遇到哪些问题呢？ 1.在细胞感染时， MOI是一个非常重要的指标，如何确定MOI值呢？ MOI:复感染指数，是指病毒对细胞的感染能力，MOI越高，细胞越难被感染。通常把某株细胞有80%被感染时所用的病毒颗粒数和细胞数目的比值作为该株细胞的MOI。 MOI=（病毒滴度×病毒体积）/细胞数目 感染条件及MOI的选择原则： 1. 在细胞形 …
阅读更多 »Cell Death Discovery | 南京大学口腔医学院：牙周膜成纤维细胞铁下垂机制新发现
《Cell Death Discovery》期刊上发表的题为“Periodontitis-level butyrate-induced ferroptosis in periodontal ligament fibroblasts by activation of ferritinophagy“的文章表明牙周炎水平的丁酸盐通过激活 NCOA4 …
阅读更多 »高滴度反转录病毒和慢病毒载体的制备
一、试剂 CaCl2 溶液( 2mol/L )、完全培养基、DMEM 培养基、乙醇（或异丙醇） (70% )、胎牛血清( FBS )、HBS 溶液(2X)、HEPES (2.5mmol/L, pH 7.3)、OptiMEM+ 1 ％青霉素／链霉素( P/S )、OptiMEM , 无P/S、pCMVDΔR8.91 质粒、pUMVC 质粒、pVSV- G 质粒 …
阅读更多 »腺病毒适用于哪些细胞？
重组腺病毒（AdV）是一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型（Ad5），其基因组是36 kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维（fiber）和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞，然后从内吞体（endosome）转移到细胞质和细胞核内，借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一 …
阅读更多 »AAV 载体
腺相关病毒（AAV) 是第一个也是唯一的改造用于基因递送的ssDNA 病毒，无包膜，直径20~26nm 的二十面体核衣壳包裹着一条4.7kb 线性ssDNA 基因组。腺相关病毒是已知最小的哺乳动物病毒，因最早发现为腺病毒样本中的一个病毒污染成分而得名。没有辅助病毒，如腺病毒共感染时，它的天然复制能力缺失，与任何人类疾病不相关(Daya and Berns 2 …
阅读更多 »如何利用好腺病毒感染的原理和特点？
一、原理 腺病毒(Adenovirus，Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒，其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型，大多数Ad载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方式取代E1和E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制，因此是一种适用于治疗的高效控制系统。 二、特点 1） 几乎可以感染所有类型的细胞 2） …
阅读更多 »慢病毒载体构建原理
慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成，即包装成分和载体成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白；载体成分则与包装成分互补，即含有包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。将包装成分与载体成分的多个质粒共转染包装 …
阅读更多 »什么是腺病毒载体？
腺病毒属于腺病毒科，分为两个属：禽腺病毒属（鸟腺病毒）和哺乳动物腺病毒属（人、猴、牛、马、猪、羊、犬和负鼠腺病毒）。这些病毒均携带一个线性双链DNA 基因组，由直径为70~100mm 的二十面体衣壳蛋白包裹。约36kb 的基因组包括4 个提供调控和复制功能的早期转录单位(El 、E2 、E3 、E4) 、2 个延迟早期单位(IX 和IVa2)和1 个指导包括 …
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