2024年 4月 12日, 星期五
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标记基因,报告基因知多少?

标记基因,报告基因,傻傻分不清楚?内行人看门道,外行看热闹。专业内的人不知道真的是要被搞哭了。我之前也是不懂,了解了以后就有种豁然开朗了的感觉。 什么是标记基因?什么是报告基因? 标记基因(marker gene)是一种能够起特异性标记作用的基因。其实就是一种已知功能或已知序列的基因,能够起着特异性标记的作用。在基因工程意义上来说,它是重组DNA载体的重要标 …

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PCR实验扩增产物出现杂带的原因

可能的原因和对应的解决方案如下: 1.引物用量偏大,引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。 2.循环的次数过多。适当增加模板的量,减少循环次数。 3.酶的用量偏高或酶的质量不好,应降低酶量或调换另一来源的酶。 4.退火温度偏低,退火及延伸时间偏长。应提高退火温度,减少变性与延伸时间,也可采用二种温度的 pcr 扩增。以 2 度为梯度设计梯度 PCR …

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手势与手语的神经处理

一项研究提示,手语和手势可能是被人类大脑的不同神经系统处理的。尽管手语和手势都传达了符号含义,但它们被认为在根本上是有区别的。 为了比较参与处理手语和手势的神经系统,Aaron Newman及其同事在一项测试中招募了19名先天性耳聋的美国手语(ASL)母语使用者与19名有听力的非手语英语母语使用者,这项测试的目的是在受试者观看非语言手势、美国手语(ASL)关 …

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siRNA转染后出现细胞死亡怎么办?

siRNA转染后细胞死亡,原因也是多样的,如脂质体毒性,转染浓度过高,转染前的细胞状态不佳等都可能导致转染后细胞死亡的情况发生,这种情况下就需要适当优化转染条件;可以选择细胞毒性小的非脂质体类的转染试剂,如纳米材料的Entranster试剂,另外,如果siRNA所靶向的基因对于维持细胞生长是非常重要的,出现细胞死亡的现象可能正是由于基因干扰引起的,如果由于细 …

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western-blot实验经验总结

  我做了很久的WB,最大的一个难点感觉在于样品制备上!蛋白的降解有些时候是你想象不到的,可能出奇的糟糕,也可能完全没事~~如果单独做WB的话,感觉以“快速彻底裂解,先变性后保存”的原则比较有效,尽量选择足够强的裂解液,甚至直接给loading buffer裂解,然后取出部分蛋白定量,其余加入loading buffer100度充分变性,再分装保存 …

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病毒感染细胞效率低怎么办?

病毒感染细胞本来效率就较低,一定要注意以下几点:1.感染时的培养基尽量少些;2. 每1ml的培养基中加入5-10ul的Polybrene(储存液浓度为2mg/ml ),可以提高效率约3-5倍。不过病毒感染效率的问题都是相对的,达到自己的研究目的即可。 病毒感染细胞本来效率就较低,整个过程相对复杂难操作,一般一次花费周期至少两三个月,多则几个月到十几个月不等, …

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如何应对悬浮细胞转染难题?

悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。     目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞 …

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质粒DNA转染实验注意事项

1, 质粒的构建:启动子的选择 启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响,但是对转染结果却有着微妙的影响。 2, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率 …

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Hela细胞转染后出现死亡的原因及解决方法

可能有多种原因: 目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡; 转染试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害; 细胞贴壁转染之后没有正常换液。 建议: 考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统; 摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试Entranster转染试剂。 对转染后的细胞进行换液处理,如果细胞状态感觉不够理想,可以考 …

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