2024年 7月 18日, 星期四
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如何达到更高的细胞DNA转染效率?

我认为,要想更高的细胞DNA转染效率,应注意以下几点: 1,   质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转 …

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免疫组化技术大全

一、免疫组织化学简介 免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体 …

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蛋白质印迹实验过程注意事项

· 滤纸、胶、膜之间的大小,一般是滤纸>=膜>=胶。 · 滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡,气泡会造成短路。 · 因为DEPF膜的疏水性,膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中,膜也必须随时保持湿润(干膜法除外)。 · 滤纸可以重复利用,上层滤纸(靠膜)内吸附有很多转移透过的蛋白质,所以上下滤纸一定不能弄混,在不能分辨的情况下,可以将靠胶滤 …

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论文标题的重要性

1. SCI 论文标题的重要性(1) 就像我们平时看报纸先看标题一样,审稿人一般首先查看SCI 论文的标题(和(或)作者)。如果感兴趣,再看摘要。如果还有兴趣,他们看论文中的图和表,然后通读全文。因此, SCI 论文标题的好坏直接影响到对论文的第一印象。(2) 论文标题是一篇论文给出的涉及论文范围与水平的第一个重要信息, 有画龙点睛的作用。有人认为SCI 论 …

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进行电转染实验时,DNA有什么要求?

        使用高纯度、无菌和无污染的DNA进行电穿孔实验。质粒DNA要求无内毒素,OD值为1.8-2.0。不建议使用微型核酸制备试剂盒准备DNA,因为它可能含有高水平的内毒素。 不要使用仅用乙醇沉淀法纯化的DNA。乙醇沉淀法中残留的盐会引起电流改变并对电穿孔产生负面影响。 建议DNA的浓度范围 …

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为什么脂质体细胞转染试剂毒性大?

已有众多的文献报道,脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC(蛋白激酶C)通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30);如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8);如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 19 …

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Hela细胞转染后几小时死亡是什么原因?

可能有多种原因:目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡;转染试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害;细胞贴壁转染之后没有正常换液。 建议:考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统;摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试Entranster转染试剂。对转染后的细胞进行换液处理,如果细胞状态感觉不够理想,可以考虑添加一些血 …

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western-blot实验注意事项总结

· 滤纸、胶、膜之间的大小,一般是滤纸>=膜>=胶。· 滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡,气泡会造成短路。· 因为DEPF膜的疏水性,膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中,膜也必须随时保持湿润(干膜法除外)。· 滤纸可以重复利用,上层滤纸(靠膜)内吸附有很多转移透过的蛋白质,所以上下滤纸一定不能弄混,在不能分辨的情况下,可以将靠胶滤纸换新 …

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RNA转染效率不佳的原因是什么?

1. RNA与转染试剂比例不佳    由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记,决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件,建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳    调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这 …

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细胞转染实验方法有哪些?

1. 脂质体法。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA,借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体则不同,DNA并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上,形成DNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面,经过内吞被导入细胞。脂质体法始于1987年,此法的出现使得转染效率、转染的稳定性和可重复性大大提高。阳离子脂质 …

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