2022年 6月 29日, 星期三
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体内转染(entranster)与fbxw5减少可减轻脊髓损伤研究

       外伤性脊髓损伤(SCI)是造成死亡和终身残疾的主要原因。然而,对脊髓损伤的病理过程还没有完全了解。F-BOX/WD重复序列包含蛋白5(FBXW5),是scf型E3泛素连接酶复合物的一个亚单位,在调节各种病理方面具有重要作用。然而,对于fbxw5对SCI进展的影响知之甚少。 现分享一篇体内转染(entranster)与fbxw5减少可减轻脊髓损伤 …

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动物体内转染实验的重复性如何?

       运用体内转染试剂Entranster进行动物体内实验时,实验的重复性或可靠性和整体的实验分不开,如果基础实验(比如细胞实验)充分,而且又有其他的方法进行印证,那么实验的可靠性就很高,这时动物体内转染就不需要太多动物,几十只动物,能说明问题就可以。但如果其他的实验较少,单纯用一种方法进行实验,就需要排除实验 …

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细胞转染实验效率影响因素

细胞转染效率受多种因素影响,主要因素有下面几个: 1.转染试剂       不同细胞系转染效率通常不同,但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然,最适合的是高效、低毒的转染试剂,如Entranster …

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如何提高悬浮细胞的转染效率?

      悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。      目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周 …

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细胞转染实验效率影响因素有哪些?

转染效率受多种因素影响,主要因素有下面几个: 1.转染试剂       不同细胞系转染效率通常不同,但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然,最适合的是高效、低 …

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细胞转染实验的几个陷阱

细胞转染是细胞生物学和分子生物学的一种常用的技术手段。而转染效率低下却是实验人员经常遇到的问题,尤其是原代细胞转染,转染难度更大。现分享几个细胞转染实验常见的几个陷阱,望实验人员能够注意。 1.准备不足 做细胞转染的时候,在开展正式实验前要多做预试验,优化转染条件。优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。 2.细 …

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细胞RNA转染注意事项

细胞RNA转染实验,需要注意以下几点: 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA …

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western-blot实验注意事项

• 滤纸、胶、膜之间的大小,一般是滤纸>=膜>=胶。 • 滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡,气泡会造成短路。 • 因为DEPF膜的疏水性,膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中,膜也必须随时保持湿润(干膜法除外)。 • 滤纸可以重复利用,上层滤纸(靠膜)内吸附有很多转移透过的蛋白质,所以上下滤纸一定不能弄混,在不能分辨的情况下,可以将靠胶滤纸换新的。 …

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shRNA转染实验步骤

下面以Entranster-R4000试剂为例,说一下shRNA转染步骤(24孔板) 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞:提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞汇合度(Confluence)在30%左右为宜,转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105,那 …

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western-blot实验过程中注意事项

滤纸、胶、膜之间的大小,一般是滤纸>=膜>=胶。 滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡,气泡会造成短路。 因为DEPF膜的疏水性,膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中,膜也必须随时保持湿润(干膜法除外)。 滤纸可以重复利用,上层滤纸(靠膜)内吸附有很多转移透过的蛋白质,所以上下滤纸一定不能弄混,在不能分辨的情况下,可以将靠胶滤纸换新的。 转移 …

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