英格恩技术博客 专注转染等实验
主页 / 其它 / 未分类

未分类

导致western Blot发光(ECL)“背景高”的原因有哪些?

Western Blot发光经常有“背景太高”问题,导致“背景高”的原因有很多,主要有以下几个方面: 1. 抗体浓度过高,洗涤不充分,可以造成抗体在膜上的非特异结合,导致高背景。可通过降低抗体稀释度,增加洗膜次数和Buffer用量,或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20加以改善。 2. 封闭不充分,会造成抗体在膜上的非特异结合,导 …

阅读更多 »

成功转染siRNA细胞铺板密度为什么很重要?

RNA转染试剂Entranster-R4000成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率和总的细胞数量就很重要,一般细胞数量较少时转染效率高,一些试剂由于本身毒性的影响,太低的细胞数量时毒性明显,所以会要求较高的细胞密度(汇合度),顺便说一句,看一个转染试剂的毒性,看它要求转染时的细胞密度就知道了。siRNA的 …

阅读更多 »

体内转染(entranster)与fbxw5减少可减轻脊髓损伤研究

       外伤性脊髓损伤(SCI)是造成死亡和终身残疾的主要原因。然而,对脊髓损伤的病理过程还没有完全了解。F-BOX/WD重复序列包含蛋白5(FBXW5),是scf型E3泛素连接酶复合物的一个亚单位,在调节各种病理方面具有重要作用。然而,对于fbxw5对SCI进展的影响知之甚少。 现分享一篇体内转染(entranster)与fbxw5减少可减轻脊髓损伤 …

阅读更多 »

RNA转染效率低的原因是什么?

RNA转染效率低,可能的原因: · 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂,如Entranster试剂。 · 转染试剂和RNA的量不够,或者比例不对。优化实验条件,调整试剂和RNA用量,优化二者比例。 · 检测时间有问题。适当调整检测时间。 · RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 · 细胞状态不佳。调整细胞状态,调整细胞融合度。

阅读更多 »

Hela细胞转染后出现死亡是什么原因?

可能有多种原因: 目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡; 转染试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害; 细胞贴壁转染之后没有正常换液。 建议: 考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统; 摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试Entranster转染试剂。 对转染后的细胞进行换液处理,如果细胞状态感觉不够理想,可以考 …

阅读更多 »

western-blot实验注意事项总结

· 滤纸、胶、膜之间的大小,一般是滤纸>=膜>=胶。· 滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡,气泡会造成短路。· 因为DEPF膜的疏水性,膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中,膜也必须随时保持湿润(干膜法除外)。· 滤纸可以重复利用,上层滤纸(靠膜)内吸附有很多转移透过的蛋白质,所以上下滤纸一定不能弄混,在不能分辨的情况下,可以将靠胶滤纸换新 …

阅读更多 »

提高慢病毒感染细胞效率的方法

可使用病毒感染增强剂envirus提高病毒的感染效率,下面以慢病毒为例,说一下实验过程。 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中,以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)。 2.感染 ⑴将2ul的EnvirusTM-LV用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成EnvirusTM-LV稀释液。4℃静置5 …

阅读更多 »

RNA转染与启动子相关的小双链RNA激活研究

最近的一些报道表明,与启动子区互补的小激活dsRNA [双链RNA;SaRNA(小激活dsRNA)]可以上调哺乳动物细胞中的基因表达,这种现象被称为RNAa(RNA激活)。然而,关于什么是启动子靶向SARNA的靶分子,以及参与该过程的蛋白质是什么等RNAa的分子机制并不清楚。现分享一篇RNA转染(Entranster)与启动子相关的小双链RNA激活研究的文献 …

阅读更多 »

细胞转染效率低的原因

转染效率低的原因可从以下几方面找: 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策:用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策:对大多数细胞而言,质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3,一般要做优化实验,比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策:用好的质粒纯化试剂确保质粒DN …

阅读更多 »