与之前文章中介绍的DEAE-葡聚糖方法相反,此替方案采用较低浓度的DEAE-葡聚糖( 250μg/mL) ,与细胞作用的时间较长(达8h) 。尽管不如使用高浓度DEAE-葡聚糖的转染效率高,但低水平的DEAE-葡聚糖细胞毒性小。 试剂 DMEM 培养基 HEPES 缓冲的DMEM 培养基 方法 转染前24h, 通过胰酶消化收集指数生长的细胞,按105 个细胞 …
阅读更多 »关于细胞培养基你需要知道的那些事
大多数实验室购买的培养基是预先处理好的瓶装液体培养基,或者是干粉状的需要水化和过滤除菌的培养基,后者比较便宜,用量大时更有价值。 由于培养基中都有酚红或其他染料pH 指示剂,虽然外观看上去都差不多,但事实上它们并不一样,所以千万不能用错。 添加有酚红pH指示剂的培养基的颜色 pH6.5 以下为拧檬黄 pH6.5 为黄色 pH7.0 为橙色 pH7.4 为红色 …
阅读更多 »电转染后细胞孵育时间是多少?
每种细胞类型电转染后有最佳孵育时间。对于质粒的电转染,最佳孵育时间一般为12-48小时,具体最佳时间需根据实验目的、质粒性质和表达蛋白的半衰期进行调整。 如需了解更多关于电转染试剂的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/efficient-electroporation
阅读更多 »RNA转染与人鼻病毒1B基因敲除和干扰素应答的再激活研究
人鼻病毒(HRV)是属于Picornaviridae家族肠道病毒属的单链正义RNA病毒。它在20世纪50年代首次被发现。将近60年后,已经鉴定出超过100种血清型/基因型病毒。HRVs(HV-A,-B,-C)是所有年龄组,尤其是儿童中呼吸道感染最常见的原因,但尚未开发出有效的治疗HVS的药物。现分享一篇RN …
阅读更多 »细胞DNA转染实验步骤
下面以Entranster-H4000,DNA转染试剂为例,简要说明DNA细胞转染实验步骤 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞密度在60%左右为宜。 2.转染过程 ⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成DNA稀释液。 注意:无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。 ⑵将2μl的 …
阅读更多 »悬浮细胞的培养
材料 装在冷冻培养瓶中的HeLa S3 细胞 70%(VIV) 乙醇 完全MEM-10 培养基, 37°C 胰蛋白酶/EDTA, 0. 25% (m/V) 胰蛋白酶/0. 02% (m/V)EDTA, 37°C 转瓶完全培养基-5, 37°C 25 cm2 组织培养瓶 湿润的、37°C 、5%CO2 培养箱 Sorvall H-6000A 转头(或相当的)和 …
阅读更多 »细胞铺板密度对于siRNA转染为什么很重要?
RNA转染试剂Entranster-R4000成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率和总的细胞数量就很重要,一般细胞数量较少时转染效率高,一些试剂由于本身毒性的影响,太低的细胞数量时毒性明显,所以会要求较高的细胞密度(汇合度),顺便说一句,看一个转染试剂 …
阅读更多 »siRNA转染效率不理想怎么办?
siRNA转染效率不理想,常见的原因有: 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记,决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件,建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率 …
阅读更多 »siRNA转染常见问题及解答
问:siRNA导入细胞有哪些方法,哪种最好? 答:siRNA导入细胞有以下几种方法:化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素:细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术是最为常用的方法,而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好。 问:哪种转染试剂效果好? …
阅读更多 »细胞转染效率不可重复怎么办?
转染效率重复性差原因: 细胞融合度不同。保证同样的接种量及同样的时间。 细菌污染。可使用Entranster试剂,培养基可加抗生素,避免细胞污染。 细胞传代次数太高了。可重新复苏一管新的细胞。 血清质量不稳定。用同一批号的血清。
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