英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
可从以下几方面进行优化： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如 …
阅读更多 »磷酸钙转染法实验原理及步骤
【实 验 原 理】 磷酸钙沉淀法是基于磷酸钙-DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法。磷酸钙有利于促进外源DNA与靶细胞表面的结合。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮作用进入靶细胞，被转染的DNA可以在细胞内进行瞬时表达，也可整合到靶细胞的染色体上从而产生不同基因型和表型的稳定克隆。该方法可广泛用于转染许多不同类型的细胞。 【仪器、材料和试 …
阅读更多 »如何达到更好的siRNA转染效率？
为了达到高的转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点： 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »如何选择合适的转染方式？
方法 表达 细胞毒性 细胞类型 注释 优势 劣势 瞬时 稳定 脂质体介导方案1 可 可 可变 贴壁细胞，原代细胞系，悬浮培养体系 阳离子脂质与带负电荷的DNA 结合， 有的形成人工膜囊泡（脂质体）。产生的稳定阳离子复合物吸附并融合于带负电荷的细胞膜( Feigner et al. 1987, 1994 ) 免疫原性和细胞毒性低；可使用大质粒， 安全风险低，操 …
阅读更多 »细胞转染为什么不能加血清？
看过很多细胞转染的高手，在做真核细胞转染时，都是在把核酸和转染试剂的混合液加入细胞表面以前，将融合的细胞的含血清的培养液弃去，用无血清培养基清晰后再加入混合物，4-6h后再换含血清的培养基。这是为什么呢？为什么这些转染试剂要求不含血清呢？ 传统的转染试剂有一定的细胞毒性，在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如，阳离子脂质体。带正电的脂 …
阅读更多 »不同类型细胞的生长形态
贴壁细胞 正常情况下观察到的细胞应该是规则均匀分布在培养皿底面上的一层细胞。每种细胞都有其自身的形态特征：球形、三角形、方形、长形等等。细胞的生长方式有些像鹅卵石铺成的路面、有些呈液涡状、有些是随机形态、而有些则覆盖了另一些细胞。 在单个细胞中能够发现一个比较暗的圆形细胞核，其内还有更暗的核仁。有时核仁大得把细胞质挤成很小的一块。分裂时期细胞核可能成半球状或 …
阅读更多 »体外培养细胞的一般性质（二）
体外培养细胞的功能表达（分化） 由于体外细胞培养的过程是不断选择具有分裂增殖能力细胞群的过程，所以细胞群一直处于变化中。体外的细胞培养物逐渐会变为处于动态平衡的由多能干细胞、未分化的定向前体细胞和成熟细胞组成的细胞群体，并且，这种平衡可随着环境条件变化而改变。在细胞密度较低的情况下，连续传代可促进细胞增殖、限制细胞分化，而高细胞密度、低血清和合适的激素条件， …
阅读更多 »转染实验常见问题解答
纳米材料转染试剂（Entranster）优势研究
纳米材料转染试剂由纳米高分子聚合物组成，分子内含有许多氨基，在生理PH下会发生质子化，这些质子化的氨基可以中和DNA质粒表面 的负电荷，使DNA 分子由伸展结构压缩为体积相对较小的DNA粒子，并包裹在其中，使DNA免受核酸酶的降解。转染复合物主要是通过细胞内吞作用将DNA 转移进入细胞，形成内含体(endosome)，DNA从内含体释放， …
阅读更多 »脂质体细胞转染试剂的缺点
已有众多的文献报道，脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC（蛋白激酶C）通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30)；如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8)；如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 19 …
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