2024年 5月 20日, 星期一
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如何选择正确的方法进行细胞的支原体检测?

几种支原体检测方法,各有优缺点。各实验室可根据具体情况,选择不同的方法,或几种方法联合使用。 1. 培养法为最为经济可靠的方法,但其实验周期较长,所以常用来进行对怀疑细胞的最后甄别。 2. 荧光指示细胞法较为快捷,方法简单,但其灵敏度有一定的欠缺, 易造成漏检。 3. PCR 法检测支原体的方法最为快速、灵敏、取样量少,既可做细胞本身,也可做细胞上清的检测, …

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细胞的支原体检测——扫描电子显微镜法

(一)原理 利用电子显微镜的超级放大功能, 直接观察培养细胞中支原体污染情况。 (二)材料与设备 待检测细胞, 0.05%胰蛋白酶/0.02%EDTA 、2.5%的戊二酸、1%饿酸、0.1mol/L磷酸缓冲溶液( pH7.4 ) ,扫描电镜及相关设备。 ( 三)操作步骤 1. 将待检测细胞传代至贴有盖玻片的培养皿中。2. 37°C , CO2 培养箱中培养2 …

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细胞的支原体检测——培养法

此种方法最为可靠且成本低廉, 但培养周期较长。常用于细胞及临床治疗细胞的支原体检查。 (一)材料与设备 1. 精氨酸肉汤培养基   按说明称量粉剂,蒸馆水配制, 高压除菌(加20%胎牛血清)。2. 支原体琼脂培养基   按说明称量粉剂,蒸馆水配制,高压除菌(加20%胎牛血清)。3. 其他   超净工作台、无菌吸管、试管架、培养试管/皿、37°C 培养箱。 ( …

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细胞的支原体检测——荧光指示细胞法

常见的支原体检测方法中最简单、最经济的方法是荧光指示细胞法。该方法使用的荧光染料是烟酸己可碱,其激发波长为350nm(紫外激发),发射波长为420nm。该染料会结合到DNA 中富含A-T 的区域,由于支原体的DNA中A-T 含量占多数(55%~80%),所以可被染色而检测到。支原体污染的细胞经染色后,在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一的荧光小点,即为支原 …

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