英格恩技术博客 专注转染等实验

Tag Archives: Western Blot

如何进行完美的Western Blot实验

条带清晰就是完美的吗?用图像软件调节明暗,用曝光时间来筛选,这样的结果可靠吗?如果在眼花缭乱的品牌和产品中快速准确地挑选好的实验用品?本视频用简短实用的方法告诉你。 本视频下载链接:https://www.engreen.cn/wp-content/uploads/2020/12/Western-Blot实验.mp4

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ECL发光液的趣事

时间:2015年8月的某天 地点:某生物公司研发部门 人物:研究的老师 英格恩销售代表 事件:几天前,某生物公司研发部门的一位老师打电话所要一瓶我们英格恩公司的ECL发光液。其实客户买我们的ECL发光液是再正常不过的了,因为在业界我们的ECL发光液还是小有名气的,每年也有几万瓶的销量,有的客户一次性能购买好几升。而且用过的客户反应,我们的ECL发光液效果稳定 …

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Western Blot化学发光(ECL)淬灭的原因?

做Western Blot发光实验经常有“淬灭”的情况发生,经常有朋友反映,加发光试剂后立刻可以看到很明显的亮光,可亮光很快就消逝了,压完片后,条带却很弱,甚至什么也没有。这种情况发生的原因是什么? 要解释这种情况发生的原因,必须先了解ECL化学发光的原理。一般的发光试剂含鲁米诺和H2O2、发光增强剂等物质。发光试剂中的鲁米诺被HRP和H2O2氧化,产生荧光 …

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免疫共沉淀经验总结分享

免疫共沉淀:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整的细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间结合的保持下来。 免疫共沉淀主要是用来研究蛋白质与蛋白质相互作用的一种技术,其基本原理是,在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Pansobin珠上的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA),若细胞中有正与兴趣蛋白结合的目的蛋白,就可以形成这样一种复合物:“ …

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Western blot 中Tween-20的作用是什么?应该怎么用?

Western blot的洗液TBST是实验室常用的配制液体,对于TBST的配方也基本上相残不多,其中配方中就有一种组分是Tween-20,一种黄色或琥珀色澄明的油状液体,具有特殊的臭气和微弱苦味。用移液枪吸取时会有一种滞后感。为什么在Western blot的洗液TBST中要加入这么一种试剂,Tween-20在Western blot 中在发挥什么样的作用 …

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WB内参的重要性

在Western Blot实验中,可能存在总蛋白浓度测定不准确;或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差。所以一般的Western Blot实验都需要进行内参设置。 内参即是内部参照(Internal Control),Western Blot实验中选择内参作为参照体系对于实验结果的分析具有很好的说明性。对于哺乳动物细胞表达来说,内参一般是指由管家 …

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封闭问题可大可小,千万不能掉以轻心

Western Blot是检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化的首选方法,也是实验室常见的实验方法。 完整的Western实验过程比较长,做一次Western也不容易。有结果当然是好的,没有结果也是常有的事,出现各种烦心结果也是时有发生。其中最常见的一种就数显色后背景高了。背景高,目的蛋白颜色对比不明显,要么看不清,图片展示不理想,更 …

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免疫共沉淀实验原理及注意事项

一 、原理: IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“prorein A“特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。 二、实验最需要注意点 1 …

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Western Blot化学发光(ECL)背景太高的原因?

做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现,要弄清“背景太高”的原因,先要知道“背景”是什么,“背景”也是发光,影响发光的因素就会影响背景。 影响发光的因素主要有:1.含HRP的抗体;2.发光试剂;3.和发光试剂反应的杂质,如含杂质的膜。这里面,在很短时间内曝光造成的背景多是由于含HRP的抗体的因素造成的,抗体浓度过高,洗涤不充分,封闭不 …

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如何上调或下调特定的miRNA?

miRNA通过与转录本的相互作用,关闭或抑制基因的表达。最近的研究表明它们影响了约三成的基因。miRNA在多个组织中差异表达,这就让表达图谱分析成为研究的重点。同时,miRNA的过表达和抑制也是近年来常用的研究方法。 然而, Peng Jin(埃默里大学) 我们使用RNA oligo和载体的方法。对于RNA oligo方法,我们采用类似siRNA双链的miR …

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