英格恩技术博客 专注转染等实验

为什么磷酸钙转染并不稳定?为什么磷酸钙转染并不经济?

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常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。后者外源DNA 既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体(episome)存在。

转染技术的选择对转染结果影响也很大。磷酸钙转染技术是由Graham等于1973年首创,实验室中转染哺乳动物细胞最广泛使用的方法。其原理是借助形成一种DNA-磷酸钙沉淀物,使其粘附于细胞表面,通过细胞的内吞作用而使DNA被细胞捕获。

磷酸钙在良好的转染条件下,可以在293T等细胞的转染达到较高的转染效率。但磷酸钙转染有一个突出的问题,非常不稳定,尤其受PH值的影响非常大,在实验中使用的每种试剂都必须小心校准,保证质量,因为甚至偏离最优条件十分之一个PH都可能导致磷酸钙转染的失败,经常即使最熟练的转染实验者也不能保证每次磷酸钙转染的成功,他们可能经常为莫名其妙的转染失败而沮丧。同时,他们还经常发现,往往小体积的转染比如6孔板以下的转染效果比较理想,可一换到大皿,经常转染效率下降很快。磷酸钙的先天缺陷往往是实验梗阻的主要原因。虽然磷酸钙成本很低,但细胞实验仅一块培养皿就十几块钱。虽然转染试剂的成本貌似节约了,但其他耗材和时间的成本却大大上升了!

EntransterTM-H受血清等环境的PH值等影响较小,即使采用质量一般的血清也可稳定地转染。EntransterTM-H在6孔板每孔的花费仅¥1.2元,比起一块培养皿就十几块钱的花费,已不是主要花费,这也正是一些实验室乐意用EntransterTM-H代替磷酸钙进行293T等细胞进行常规转染的主要原因。

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