向哺乳动物细胞内转染反义寡核苷酸从而抑制miRNA 功能的具体方法参照本方案。通过检测miRNA 靶蛋白水平或携带miRNA 靶基因的3’端非翻译区( 3UTR ) 报道基因的活性来检测ASO 对于miRNA 的效应。本方案主要针对24 孔板设计,如果用其他多孔板、细胞瓶或不同直径培养皿培养细胞,需根据孔/瓶表面积计算细胞密度和试剂体积 试剂 A …
阅读更多 »为什么选择AAV作为基因治疗的病毒载体?
AAV,即腺相关病毒载体,属于细小病毒科依赖病毒属。野生型AAV感染人宿主细胞后,可以整合到人类19号染色体的AAVS1位点,但AAV不会引起人类疾病。实际上,我们市面常见的AAV并不是野生型AAV,而是重组AAV(rAAV)。 AAV和AAV载体的基因组结构(图片来源:Semantic Scholar) 目前来看,rAAV相比较其他病毒载体,未发现 …
阅读更多 »成功转染siRNA的主要关键点有什么?
1.设计合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。siRNA的设计合成首先很重要,最优的设计可以用最小的工作浓度取得满意的沉默效果,减少副反应的发生。siRNA的设计可以通过检索,优先选用经过验证的siRNA或设计多对siRNA。需要强调的是,需要同时设置阴性对照以排除非特异沉默现象和阳性对照以确认整个实验体系的有 …
阅读更多 »高效低毒的RNA转染试剂,收藏~
EntransterTM-R4000是英格恩生物(Engreen Biosystem)最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂。EntransterTM-R4000不仅可以转染小RNA,而且针对mRNA等长链RNA优化。 EntransterTM系列转染试剂的成分和原理 Entr …
阅读更多 »如何使动物体内病毒感染效率提高20-50倍
由于动物体内环境的复杂性,我们在选择动物体内病毒感染试剂时,会区别于细胞实验。通常为避免动物产生过激的免疫反应或者死亡,这类病毒感染试剂纯度会更高些,并且适配体液环境。因此,争对动物体内病毒感染实验,则需要适配特定的动物体内病毒感染增强试剂。 发表在《aging》上的一篇题为“Ubenimex induces autophagy inhibition and …
阅读更多 »动物体内转染常见问题与解决方案
EntransterTM-in vivo体内转染试剂通过纳米技术合成,通过物理作用与核酸结合,浓缩包裹核酸,从而保护核酸免受免疫系统破坏,同时增强核酸进入细胞核中表达。不含任何动物来源成分,由于处于纳米尺度,粒径小,不易引起免疫反应,不影响动物和器官组织的功能,可以多次在同一动物注射。 一般情况下,核酸(μg)和EntransterTM-in vivo (μ …
阅读更多 »磷酸钙-DNA共沉淀法的原理和步骤
前些时间有微友在平台上咨询细胞转染的事项,并对一篇博客文章《为什么磷酸钙转染并不稳定?为什么磷酸钙转染并不经济?》比较感兴趣。在这里,对这位微友的疑惑进行更加全方位的了解,在此将磷酸钙转染的原理和步骤和大家分享,以供交流讨论。 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时,可使 DNA 附在细胞表面,这有利于细胞吞入摄取核酸,或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进 …
阅读更多 »细胞转染为什么不能加血清?
看过很多细胞转染的高手,在做真核细胞转染时,都是在把核酸和转染试剂的混合液加入细胞表面以前,将融合的细胞的含血清的培养液弃去,用无血清培养基清晰后再加入混合物,4-6h后再换含血清的培养基。这是为什么呢?为什么这些转染试剂要求不含血清呢? 传统的转染试剂有一定的细胞毒性,在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如,阳离子脂质体。带正电的脂 …
阅读更多 »通过MTT 法分析细胞活力
在众多依赖于活细胞将底物转化为生色产物的活力检测方法中,由Mossman ( 1983 )建立的MTT 法仍是最通用、最流行的方法之一。在MTT 法中,水溶性的黄色染料MTT [3-(4 , 5 - 二甲基噻唑-2)-2 , 5 -二苯基四唑溴盐] 在线粒体还原酶作用下转化为不溶性的紫色甲臜( 图1 ) 。随后甲臜被溶解,其浓度通过570nm 下的OD 值被 …
阅读更多 »动物体内转染需要哪些条件?
1.每次动物实验,需要准备什么东西,器材? ①转染的核酸,如siRNA,miRNA,mimic、inhibitor,也可以转染DNA。 ②转染试剂和动物。 ③进行注射的器材。 2.可以转染的核酸都有什么?细胞实验的核酸可以用吗? 可以转染小片断RNA如siRNA,miRNA,mimic、inhibitor,也可以转染DNA。进行体外细胞实验的核酸就可以。但要 …
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