2024年 12 月 6日, 星期五
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双质粒共转染哺乳动物细胞,出现其中一个质粒表达量降低,而另一个质粒表达正常的情况,原因和解决办法

可能的原因: 质粒竞争效应: 在共转染过程中,两个质粒可能在转染效率、复制能力或表达资源(如转录因子和核糖体)上竞争。一个质粒可能因此受到抑制,导致其表达量下降。 解决方法: 提高低表达质粒的比例,例如2:1或更高。 尝试使用等摩尔浓度(而非等质量浓度)的质粒来转染。 质粒质量或纯度差异: 低表达质粒可能存在降解、污染或纯化不完全的问题,从而影响其转染效率或 …

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慢病毒滴度的计算

实验准备 目标细胞:选择适合慢病毒感染的细胞株(如 HEK293T 或靶细胞)。 病毒稀释:对病毒原液进行一系列梯度稀释(如 10−1,10−2,10−3,10−4)。 感染细胞:将稀释后的病毒感染到目标细胞中,确保设置对照组(未加病毒)。 培养:培养 48-72 小时(根据病毒系统和荧光/抗性蛋白表达时间调整)。 检测方法:检测报告基因表达水平(如荧光蛋白 …

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慢病毒感染中细胞密度需要考虑的因素

细胞类型: 不同细胞系对慢病毒的感染效率不同。例如,一些细胞对病毒更敏感,需要更低的病毒量和细胞密度。 敏感细胞系(如HEK293T):种植密度可稍低; 难感染细胞系(如原代细胞):需要更高密度。 病毒滴度: 如果病毒滴度高,细胞密度可以稍低。 如果病毒滴度较低,建议适当提高种植密度,并配合 增强试剂(如Polybrene) 提高感染效率。 感染目标: 如果 …

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慢病毒感染12孔板种植多少细胞合适

在慢病毒感染实验中,12孔板中种植的细胞密度需要根据以下因素优化: 一般种植密度建议: 悬浮细胞: 每孔种植 1×10⁵ 至 2×10⁵ 个细胞。 贴壁细胞: 每孔种植 5×10⁴ 至 1×10⁵ 个细胞。 对于贴壁细胞,建议种植后培养 24小时,让细胞达到约 30%-50% 的汇合度(confluency),然后进行病毒感染。这种密度能确保细胞有充足的分裂 …

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