2024年 5月 20日, 星期一
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免疫球蛋白G ( IgG) 片段的水解(二)

基本方案2   木瓜蛋白酶水解IgG 获取Fab 片段的大量制备 材料 木瓜蛋白酶 ( 2 X 重结晶悬液 ) 水解缓冲液:0.02mol/L EDTA ( 二钠盐) / 0.02mol/L 半胱氨酸/PBS (新鲜配制,冰上保存<10h) 溶于PBS 中浓度≥1mg/ml 的IgG ( 总量≥5mg ) 碘乙酰胺结晶 PBS, pH8. 0 蛋白A …

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免疫球蛋白G ( IgG) 片段的水解(一)

基本方案1   木瓜蛋白酶水解IgG 成Fab 片段摸索性试验 此法适用于小鼠(任何亚类)、大鼠、人、山羊、绵羊、马、鸡、豚鼠和牛的 IgG 水解。 材料 保存于 PBS 中的 2mg/ml 纯化的lgG 木瓜蛋白酶 水解缓冲液:0. 02mol/L EDTA ( 二钠盐) / 0. 02mol/L 半胱氨酸/PBS (新鲜配制,冰上保存<10h) 溶 …

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免疫球蛋白G (IgG) 的纯化(二)

基本方案2  蛋白A交联琼脂糖凝胶亲和层析 蛋白A 通常用于人(除lgG3外;小鼠lgG1 结合力也较弱)、兔、豚鼠和猪抗体的纯化。 材料 腹水或MAb 上清 PBS, pH8.0 和pH 7.3 1mol/L NaOH 蛋白A 交联琼脂糖凝胶CL-4B 0.1mol/L 柠檬酸, pH 按照所分离的抗体亚类的需要而定(步骤3) 10% (m/V) NaN3 …

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免疫球蛋白G (IgG) 的纯化(一)

基本方案1 硫酸铵沉淀和凝胶过滤层析 硫酸铵沉淀可纯化小鼠抗体的所有亚类和其他种属抗体,本方案也可用于纯化任何种属的lgM 、lgG 和lgA 材料 腹水或MAb 上清 PBS 饱和硫酸铵(SAS) 硼酸盐缓冲液(可选) 聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶S-200 Superfine (Pharmacia Biotech) 含有0. 02% (m/V) NaN3 的PB …

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