英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
表观遗传修饰在基因表达调控中起关键作用。为了了解表观遗传修饰在不同的环境中如何改变单核细胞来源的树突状细胞（DC）miRNA的表达，现分享一篇RNA转染（Entranster）与树突状细胞相关的miRNA调节研究的文献，以供参考。
阅读更多 »树鼩CRISPR筛选发现RNF6促进寨卡病毒跨越血脑屏障
标题: Tree Shrew Genome-Wide CRISPR Screen Identifies RNF6 as a Proviral Host Factor for Zika Virus Replication in Brain Microvascular Endothelial Cells （树鼩全基因组CRISPR筛选鉴定出RNF6是寨卡病毒在脑 …
阅读更多 »siRNA细胞转染效率低下的原因
1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与膝关节骨性关节炎中WISP-1调控机制研究
随着生活、工作方式的改变及社会人口的老龄化，骨关节退行性病变已成为高发疾病，其中代表性疾病之一为骨性关节炎（osteoarthritis, OA）。最近研究表明：WISP-１ 具有促进关节软骨破坏的作用 。WISP-１ 在正常软骨和滑膜中几乎不表达，而在退变的软骨及滑膜（如OA）中WISP-１异常增高，通过诱导ＭＭＰs及aggrecanases的 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与启动子相关的小双链RNA激活研究
最近的一些报道表明，与启动子区互补的小激活dsRNA [双链RNA；SaRNA（小激活dsRNA）]可以上调哺乳动物细胞中的基因表达，这种现象被称为RNAa（RNA激活）。然而，关于什么是启动子靶向SARNA的靶分子，以及参与该过程的蛋白质是什么等RNAa的分子机制并不清楚。现分享一篇RNA转染（Entranster）与启动子相关的小双链RNA激活研究的文献 …
阅读更多 »如何优化RNA转染条件？
可从以下几方面进行优化： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如 …
阅读更多 »siRNA细胞转染操作步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »细胞siRNA转染有哪些方法？
siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术（Entranster）是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好。
阅读更多 »siRNA转染与肝肺综合征有关的肺血管重构中细胞骨架蛋白研究
肝肺综合征（HPS）是肝病，肺内血管扩张（IPVD）和低氧血症的三联征，动脉低氧血症可引起肺血管重构（PVR）。在最近的研究中，与HPS有关的PVR中肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用已确定；细胞骨架蛋白的变化在细胞增殖中起着重要的作用。但与HPS有关的PVR中细胞骨架蛋白表达与分子机制相关性知之甚少。现分享一篇siRNA转染（Entranster）与细胞骨架蛋白 …
阅读更多 »siRNA转染实验的关键点
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …
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