喉癌是头颈部第二常见的恶性肿瘤,最常见的表现为鳞状细胞癌。这种疾病的发病率正在增加,然而,其发展的机制尚不完全清楚。因此,寻找新的喉鳞状细胞癌(LSCC)的诊断和治疗方法变得尤为重要。 现分享一篇RNA转染(Entranster)与siRNA靶向骨膜蛋白对人喉鳞状细胞癌抑制作用研究的文献,以供参考。
阅读更多 »电转染实验时,对于指数衰减形式的脉冲条件是什么?
对于Entranster-E电转染试剂,当使用0.4cm电转杯时,大多数细胞类型的指数衰减脉冲条件在200-300V的电压范围和800-1000μF的电容范围内。对于0.2 cm电转杯时,其范围分别为80-160 V和800-1000μF。对于使用0.4 cm电转杯的电穿孔实验,测试电压范围为200–30 …
阅读更多 »如何提高qPCR反应的灵敏度与特异性?
首先确定模板RNA完整性好,无DNA污染。 RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。 为了防止模板降解,在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。 使用适量的模板RNA,模板量太多会降低特异性,太少会导致扩增不出条带或条带太弱。 若模板中有二级结构,可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。 设计引物时,避免在引物3’端含有互补序列,避免形成内部发卡结构。 可 …
阅读更多 »如何做好细胞电转染实验?
要想做好细胞的电转染实验,应注意以下几点: 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择合适的细胞 用于电转的细胞 …
阅读更多 »进行电转染实验时,DNA有什么要求?
使用高纯度、无菌和无污染的DNA进行电穿孔实验。质粒DNA要求无内毒素,OD值为1.8-2.0。不建议使用微型核酸制备试剂盒准备DNA,因为它可能含有高水平的内毒素。 不要使用仅用乙醇沉淀法纯化的DNA。乙醇沉淀法中残留的盐会引起电流改变并对电穿孔产生负面影响。 建议DNA的浓度范围 …
阅读更多 »你会正确使用超净台吗?
超净工作台(clean bench)是为了适应现代化工业、光电产业、生物制药以及科研试验等领域对局部工作区域洁净度的需求而设计的。超净工作台原理是在特定的空间内,室内空气经预过滤器初滤,由小型离心风机压入静压箱,再经空气高效过滤器二级过滤,从空气高效过滤器出风面吹出的洁净气流具有一定的和均匀的断面风速,可以排除工作区原来的空气,将尘埃颗粒和生物颗粒带走,以形 …
阅读更多 »怎样有效提高细胞转染实验效率?
1.选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同,但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然,最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的纳米材料的Entranster试剂。 2.保持最佳的 …
阅读更多 »western-blot实验的影响因素有哪些?
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量,蛋白变性是否充分等等,还有,蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外,蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝 …
阅读更多 »qPCR试剂对比3
如图所示,engreen的产品在实验中,Ct值更低,无NTC扩增,特异性高,是理想的qPCR试剂。
阅读更多 »RNA转染实验注意事项
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮肤,头发,所有徒手接触过 …
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英格恩生物技术博客 生物实验干货分享