英格恩技术博客 专注转染等实验
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western-blot实验注意事项总结

· 滤纸、胶、膜之间的大小,一般是滤纸>=膜>=胶。· 滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡,气泡会造成短路。· 因为DEPF膜的疏水性,膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中,膜也必须随时保持湿润(干膜法除外)。· 滤纸可以重复利用,上层滤纸(靠膜)内吸附有很多转移透过的蛋白质,所以上下滤纸一定不能弄混,在不能分辨的情况下,可以将靠胶滤纸换新 …

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提高慢病毒感染细胞效率的方法

可使用病毒感染增强剂envirus提高病毒的感染效率,下面以慢病毒为例,说一下实验过程。 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中,以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)。 2.感染 ⑴将2ul的EnvirusTM-LV用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成EnvirusTM-LV稀释液。4℃静置5 …

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RNA转染与启动子相关的小双链RNA激活研究

最近的一些报道表明,与启动子区互补的小激活dsRNA [双链RNA;SaRNA(小激活dsRNA)]可以上调哺乳动物细胞中的基因表达,这种现象被称为RNAa(RNA激活)。然而,关于什么是启动子靶向SARNA的靶分子,以及参与该过程的蛋白质是什么等RNAa的分子机制并不清楚。现分享一篇RNA转染(Entranster)与启动子相关的小双链RNA激活研究的文献 …

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细胞转染效率低的原因

转染效率低的原因可从以下几方面找: 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策:用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策:对大多数细胞而言,质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3,一般要做优化实验,比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策:用好的质粒纯化试剂确保质粒DN …

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体内转染与siRNA在病毒性心肌炎小鼠模型中的抗病毒作用研究

      Coxsackie Virus属于小RNA 病毒科,肠道病毒(enteroviruses)属,是导致病毒性心肌炎的主要病毒之一,多发于儿童和青少年,可引起急性心力衰竭,部分可发展为扩张性心肌病,严重危害少年儿童健康,目前临床缺乏特异有效的药物。RNA干扰自1998 年《Science》杂志报道以来,已被广泛 …

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RNA转染(Entranster)与IL-17下调小鼠胶原性关节炎嗅间充质干细胞的免疫抑制能力研究

嗅间充质干细胞(OE-MSCs)是嗅觉固有层中一种新的常驻干细胞类型。OE-MSCs通过调节T细胞的反应,包括调节性T细胞(Treg)的上调和Th1/Th17细胞的下调而发挥其免疫抑制能力。作为炎性细胞因子,IL-17在胶原诱导性关节炎(CIA)的发展过程中起着关键的作用。然而,目前尚不清楚IL-17水平的升高是否会影响OE-MSCs在炎症状态下的免疫抑制功 …

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CCK8(engreen)与CD147增加慢性阻塞性肺病患者吸烟引起的粘液分泌研究

CD147在许多组织中表达,并参与许多炎症性疾病。新的证据表明,粘液分泌过多是慢性阻塞性肺病(COPD)的一个恶性因素,导致严重的气道阻塞和反复的气道感染。然而,CD147是否参与慢性阻塞性肺病的粘液生成尚不清楚。现分享一篇CCK8(engreen)与CD147增加慢性阻塞性肺病患者吸烟引起的粘液分泌研究的文献,以供参考。

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体内转染(entranster)与细胞自噬和大鼠缺血性损伤研究

      卒中尤其是缺血性卒中,可能导致严重的神经功能障碍,甚至死亡,在世界范围内有较高的发病率和死亡率。脑缺血后神经元凋亡、自噬、坏死等形态学变化产生细胞死亡的复杂特征。细胞自噬参与了II型程序性细胞死亡,并且在脑缺血中,自噬作用在累积。自噬作用是复杂的,取决于大脑的成熟度,区域的缺血严重程度等。现分享一篇运用体内 …

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怎样做好siRNA细胞转染?

1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮 …

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如何解决悬浮细胞转染难题?

      悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。     目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞 …

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