英格恩技术博客 专注转染等实验
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细胞增殖-毒性检测实验步骤

CCK8试剂盒,是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度,无放射性的比色检测法。CCK法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。下面以engreen的CCK8试剂盒为例,简要说明细胞增殖-毒性检测的操作步骤 方法/步骤 在96孔板中配制100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时 …

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RNA干扰现象简介

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来生命科学领域最为重大的发现之一。它是指小分子双链RNA可以特异性地降解或抑制同源mRNA表达,从而抑制或关闭特定基因表达的现象。人们只要知道了某种疾病的致病基因,就可以设计出针对该基因mRNA的小分子干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA),抑制或封闭该致病基因的表达 …

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siRNA转染与DNA转染有什么不一样?

         首先siRNA由于只有二十几个碱基对,相比DNA几千上万对碱基,小了许多。目前大多数转染试剂都针对比较大的质粒DNA,而非小的RNA分子。用于转染DNA的转染试剂和方法并不完全适用于转染siRNA。 其次,siRNA转染比DNA转 染对转染试剂细胞毒性的要求严格。由于转染试剂对细胞的毒性往往是对众多基因直接地或间接地上调或下调的结果,这对于 …

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成功siRNA转染的主要关键点有什么?

1.设计合成有效的siRNA RNAi的核心需要 siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。siRNA的设计合成首先很重要,最优的设计可以用最小的工作浓度取得满意的沉 默效果,减少副反应的发生。siRNA的设计可以通过检索,优先选用经过验证的siRNA或设计多对siRNA。需要强调的是,需要同时设置阴性对照以排 除非特异沉默现象和阳性对照以确认整个实验体 …

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英格恩生物携手南开大学 揭示癌症信号调控机制

Hippo信号通路是一条细胞抑制生长性信号通路,在进化过程中非常保守,多 细胞动物果蝇、小鼠、哺乳动物中都存在Hippo信号通路。最早研究人员在果蝇中发现Hippo信号传导路径是调节细胞大小,器官体积的主要信号通路。之 后研究人员证实Hippo信号通路具有高度保守型,果蝇中Hippo信号通路的成员都能在高等生物中找到对应的同源物。在哺乳动物中,Hippo信号 …

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磷酸钙-DNA共沉淀法的原理和步骤

前些时间有微友在平台上咨询细胞转染的事项,并对一篇博客文章《为什么磷酸钙转染并不稳定?为什么磷酸钙转染并不经济?》比较感兴趣。在这里,对这位微友的疑惑进行更加全方位的了解,在此将磷酸钙转染的原理和步骤和大家分享,以供交流讨论。 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时,可使 DNA 附在细胞表面,这有利于细胞吞入摄取核酸,或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进 …

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美国专家公布有关寿命的9个新发现:久坐不动最减寿

责任心强,更长寿。 一项长达8年的研究显示,各种性格特征中,责任心最有助长寿。斯坦福大学研究人员表示,做人谨慎细心、做事耐心有计划,像研究人员那样有点强迫症倾向,都有助长寿。这类人做事自觉,对待婚姻、工作、健康各方面,往往能做出正确的选择,不太会因为抽烟、飙车,不遵医嘱等原因而意外丧生。 饮食定生死。 研究人员发现,地中海饮食是有助长寿的饮食方式,即多吃果蔬 …

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免疫共沉淀经验总结分享

免疫共沉淀:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整的细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间结合的保持下来。 免疫共沉淀主要是用来研究蛋白质与蛋白质相互作用的一种技术,其基本原理是,在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Pansobin珠上的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA),若细胞中有正与兴趣蛋白结合的目的蛋白,就可以形成这样一种复合物:“ …

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免疫组化实验结果的判定原则和分析标准

免疫组化实验结果的判定和分析,就实验结果而言,免疫组化技术主要涉及抗体实验结果的描述与分析、图片的确定与选取、相关数据的提供。 免疫组化结果的判定原则: ⒈必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。 ⒉抗原表达必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上;CK应定位在细胞浆内;PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内;EMA应定位在细胞膜上等等。 …

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