分子生物学

表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液 　 不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml） 溶液成分 5 10 15 20 25 30 40 50 6% 水 2.6 5.3 7.9 10.6 13.2 15.9 21.2 26.5 30%丙烯酰胺溶液 1 2 3 4 5 6 8 10 1.5 mol/L Tris (pH …

一、 实时荧光定量PCR技术是一种新型的科学定量方法，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。   该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广泛应用。 二、 目前，荧光定量PCR所使 …

骨质疏松症是最常见的骨骼疾病之一，严重影响老年人的健康和生活质量。成骨细胞分化和骨形成的减少导致骨量和微结构的变化，使骨骼容易发生骨折。佛手柑素（BM）是一种来自各种柑橘类水果的天然化合物，具有多种生物活性，包括抗脂肪生成的功能 2022年1月30日，发表于Food &Function的一篇题为Bergamottin promotes osteobl …

降解是蛋白质纯化过程中最害怕发生的事情。 基本规则： 划重点：做关于蛋白质的实验时，手边一定要备一个冰桶，管子从冰箱或者冷冻的状况下取出时马上放到冰上。 1. 必须冷冻离心，因为离心会产热。 2. 了解蛋白质的特性。每一个蛋白质性质差异很大，热会使你的蛋白质变性吗？有二硫键吗？能反复冻融吗？如果你不知道，那假定它不能被冷冻和再解冻是热变性的。 3. 在细胞裂 …

问题 可能原因 解决方法 放射自显影片空白   DNA 聚合酶失活 标记物太旧   用对照引物、模板及试剂进行试验   试剂太旧   替换缺陷试剂 不正确或有缺陷的引物     不正确或有缺陷的模板,     曝光失误（如保留了保鲜膜，凝胶对着胶片的背面等 改正错误 整张放射自显影片太亮／标记物掺入不足 标记物太旧   采用新标记物   酶活性太低   采用 …

1.样品处理： 培养细胞：收获细胞1~5×107，加入1ml Trizol（异硫氰酸胍/酚）（在冰箱旁边取出白细胞即刻加入Trizol），混匀；用1ml注射器反复抽取（约30次）以破裂细胞及剪切DNA，室温静置5min（使核酸蛋白复合物完全分离）。 组织：取50~100mg组织（新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可）置5ml EP管中，加入1ml Trizo …

Western Blot是检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化的首选方法，也是实验室常见的实验方法。 完整的Western实验过程比较长，做一次Western也不容易。有结果当然是好的，没有结果也是常有的事，出现各种烦心结果也是时有发生。其中最常见的一种就数显色后背景高了。背景高，目的蛋白颜色对比不明显，要么看不清，图片展示不理想，更 …

因为蛋白质是细胞结构与功能的主要分了成分，因此常常需要测定样品中蛋白质的含量，鉴定混合物中的特殊蛋白质，以及分析蛋白质的组成和序列。此外，蛋白质分析对合成用于诱导抗体生成的多肽，设计供克隆用的寡核苷酸探针以及证实序列数据的正确性是十分必要的。 为确保蛋白质通过电泳技术获得最好的分离，首先有必要估计待测样品中蛋白质的浓度。如果不做分析，蛋白质总量不足就可能妨碍 …

· 滤纸、胶、膜之间的大小，一般是滤纸>=膜>=胶。 · 滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡，气泡会造成短路。 · 因为DEPF膜的疏水性，膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中，膜也必须随时保持湿润（干膜法除外）。 · 滤纸可以重复利用，上层滤纸（靠膜）内吸附有很多转移透过的蛋白质，所以上下滤纸一定不能弄混，在不能分辨的情况下，可以将靠胶滤 …

转子主要有4 种类型：角式、外摆式、连续流式以及区带式。只有角式与外摆式转子是标准的实验室仪器，另外两种只用作专门用途。 角式转子 用途：样品浓缩。实验室中的“苦力” 。 说明：样品沿着与旋转平面成一定角度的方向离心。 优点：离心见效最快。物质具有更高的相对离心力，比在外摆式转子中沉降快。机器的活动组件少，损坏机会小。 缺点：物质被驱向离心管的管壁方向，然后 …