2022年 6月 26日, 星期日
新闻

Tag Archives: PCR

PCR实验步骤及常见问题汇总

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点。 一、    聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR) PCR由变性–退火–延伸三个基本反应步骤构成: ①    …

阅读更多 »

琼脂糖凝胶电泳拖尾了怎么办?

跑过琼脂糖凝胶电泳的小伙伴,是不是经常遇到过电泳拖尾的现象啊?相信不少人点头如捣蒜了。提个质粒拖尾,提个DNA拖尾,连PCR也拖尾,拖尾什么的最常见了。验证也就算了,关键是图片拍出来不好看了,发文章什么的太影响档次了。下面我就跟据自己的经验跟大家讲讲琼脂糖凝胶电泳为什么会拖尾,有不足的希望大家多多评论补足啊(三人行必有我师嘛)!! 那琼脂糖凝胶电泳为什么会拖 …

阅读更多 »

重叠延伸PCR实验

重叠延伸PCR实验 重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,简称SOEPCR)由于采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成了重叠链,从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸,将不同来源的扩增片段重叠拼接起来。 实验方法原理: 此技术利用PCR技术能够在体外进行有效的基因重组,而且不需要内切酶消化和连接酶 …

阅读更多 »

PCR实验最常见的9个问题及解决方案

1. 如何有效设计引物 (1)使用Oligo或Primer设计引物,在保守区内设计,长度一般在18-27bp,上下游引物Tm值最好是60-75℃,GC含量=40%-60%,引物自身及引物之间不应存在互补序列,避免发夹结构。 2. PCR电泳无扩增条带 (1)酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活,往往通过更换新酶或用另一来源的 …

阅读更多 »

师姐真传的一些引物设计技巧(师姐比师兄靠谱)

实验室小白遇上引物设计,一片迷茫,不知所措。 师姐:现在常用的的引物设计软件有Oligo、PrimerPremier、DNA man等等,还有在线引物设计软件。咱实验室的软件给你拿去。 (师姐比师兄靠谱,真的是手把手的教了,边操作边讲解。) 1.    在NCBI上搜索到该基因,找到该基因的mRNA,在CDS选项中,找到编码区所在位置,在下面的origin中 …

阅读更多 »

那些年,我做过的酶切

本人读研期间,我们实验室的核心项目是某大型传染性疾病的研究,核心技术是基因敲除。进实验室的师兄师姐师弟师妹,人手一个基因敲除,有的甚至两三个一起敲,还有共敲除(反正就是变着花样的敲就对啦) 我也不例外,除了我的课题还有其他任务外,外加一个基因敲除。不要说导师把我们当牲口使,谁让我们的毕业大事掌握在他手里呢。 其实基因敲除是个不简单的工作,对当时的我来说。就从 …

阅读更多 »