2026年 11 月 4日, 星期三
新闻

细胞转染

进行2个不同基因的siRNA共转染,需要加大核酸或者转染试剂的剂量吗?这个和做2个质粒共转染有什么区别?

进行2个不同基因的siRNA共转染时,确实可能需要调整核酸或者转染试剂的剂量,但和质粒共转染的情况有一些区别。 转染试剂的剂量: 当你进行siRNA共转染时,转染试剂的剂量通常依赖于转染效率。对于siRNA来说,一般情况下转染试剂的量不需要比单一siRNA转染时增加太多,因为转染试剂的作用主要是包裹和传递siRNA到细胞内,只要达到足够的转染效率就可以。如果 …

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siRNA转染后什么时候做qRT-PCR检测最好?

1.siRNA转染后什么时候做qRT-PCR检测最好? siRNA的沉默效果是有时效性的,在最佳的时间点观察,会得到更加明显的沉默效果,这个时间点的确定不能以同一株细胞转染DNA的经验确定,因为一个是消耗mRNA,一个是产生mRNA。对转染siRNA,在核酸水平,转染后8-48小时,即可观察到mRNA水平的逐步下降,一般来说,转染后48小时进行qRT-PCR …

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质粒DNA转染注意事项

1.启动子的选择启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响,但是对转染结果却有着微妙的影响。2.质粒的大小和质量线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒 …

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在慢病毒感染细胞的实验中,感染后细胞状态看起来正常,但传代培养后细胞死亡较多的原因

在慢病毒感染细胞的实验中,感染后细胞状态看起来正常,但传代培养后细胞死亡较多,这种情况可能与以下原因有关: 1. 慢病毒感染对细胞的潜在毒性 尽管慢病毒是常用的载体,感染后可能对细胞有一定的毒性: 病毒对细胞的应激反应: 病毒感染会引发细胞应激,可能暂时未表现出问题,但在传代过程中细胞状态恶化。 载体元件的毒性: 慢病毒载体中的某些元件(如强启动子)可能会对 …

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如何选择哺乳动物高效表达载体

选择适合哺乳动物细胞的高效表达载体时,通常需要考虑以下几个关键因素: 1. 目标蛋白的特性 蛋白大小和复杂性:如果你的目标蛋白比较大或具有复杂的后期修饰(如糖基化、磷酸化等),你需要确保载体能支持这些修饰。哺乳动物细胞通常用于表达这种需要后修饰的蛋白。 表达水平:有些载体可以提高蛋白表达的水平。你可以根据实验需要选择一个具有高表达效率的载体。 2. 选择合适 …

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细胞转染效率的影响因素

1.细胞密度   一般来说,当细胞密度达到60%~80%时进行转染可以取得较高的转染效率,过低或过高都会影响转染效果。 2.细胞状态   这点非常关键,很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此,为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性,应尽量使用适度传代的细胞系,并在不同次实验时保持细胞传代次数的一致性。   还有,尽量选择无 …

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