2024年 6月 16日, 星期日
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用AUTOMACS 系统进行总T 细胞、CD4^+细胞或CD8^+ T细胞的自动分离

材料 小鼠 HBSS 洗涤缓冲液 MACS 缓冲液 磁珠 RPMI-10 完全培养基 autoMACS 系统和分选柱 30μm 尼龙网或40μm预分离滤膜 步骤 用 5 只小鼠的淋巴结或 2 只小鼠的脾脏制备单细胞悬液并去除红细胞 。 将细胞在10ml HBSS 洗涤缓冲液中混悬后用血细胞计数器计数 。 将细胞悬液在4℃,200g 离心10 min。弃上清后 …

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从脾脏、胸腺和淋巴结制备小鼠细胞悬液

材料 RPMI-5 或DMEM-5 完全培养基 新鲜分离的小鼠器官: ≤6 周龄的小鼠胸腺; 6 周至6 个月龄的小鼠脾脏和淋巴结 60mmX15mm 培养皿 剪刀和镊子(保存在70 %乙醇的烧杯中) 装有19G 针头的6ml 注射器 200μm 尼龙滤网 步骤  将新鲜分离的器官放入盛有3ml RPMT-5 或DMEM-5 完全培养基的60mmX15mm培 …

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免疫球蛋白G ( IgG) 片段的水解(四)

基本方案4   胃蛋白酶水解IgG 获取F (ab’)2 片段的大量制备 材料 ≥1mg/ ml 纯化的IgG 适当pH 的乙酸缓冲液 : 0. 2mol/L 乙酸钠,用冰乙酸调至所需pH 2mol/L Tris 碱 PBS, pH8.0 蛋白A 交联琼脂糖凝胶CL-4B 半胱氨酸,可选 碘乙酰胺结晶,可选 聚丙烯酰胺葡聚糖S-200 Super …

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免疫球蛋白G ( IgG) 片段的水解(三)

基本方案3  胃蛋白酶水解IgG 成F(ab’)2 片段的摸索性试验 在此试验中摸索在两个不同pH 下IgG 的水解情况,因为IgG 在低pH 下会水解成Fab 片段或更小的片段。胃蛋白酶的水解比木瓜蛋白酶更剧烈,因此推荐的酶/抗体 (E/A) 比例以不超过1: 20 为佳。 注意:从IgG2b水解不能得到F (ab’)2 片段,用胃 …

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