英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
小干扰RNA（siRNA）是通过RNA干扰（RNAi）在体外和体内抑制特定蛋白质合成的有力工具，由于RNAi利用天然途径，即在蛋白质翻译发生之前，在转录后水平上关闭基因表达，因此，siRNA诱导下调基因表达对基础研究和应用研究有着巨大的影响。siRNA及其递送系统的化学修饰已被建议用于改善细胞内siRNA递送和药代动力学性质。现分享一篇体内转染（Entran …
阅读更多 »ECL发光液（enlight）与存活素和食管癌细胞放射增敏作用研究
食管癌在中国是一种常见的癌症。手术是食管癌的主要治疗手段，但放疗和化疗在临床分期上也有广泛的应用。放射治疗通常与化疗和靶向治疗相结合。然而，放射治疗效果仍然令人不满意，放射抗性在临床治疗中非常普遍，导致可能的治疗失败。因此，迫切需要提高放射敏感性的策略。现分享一篇ECL发光液（en …
阅读更多 »电转染实验时，siRNA有什么要求？
使用高纯度、无菌的siRNA。确定电转染的最佳siRNA浓度。建议在250-750nM最终浓度范围内的进行siRNA不同浓度的梯度实验。建议设置一个非靶向或无意义的siRNA对照序列，以验证实验siRNA的特异性。同时也验证，针对单个基因用多个siRNA序列实验产生的表型是否是由于脱靶 …
阅读更多 »高滴度反转录病毒和慢病毒载体的制备
一、试剂 CaCl2 溶液( 2mol/L )、完全培养基、DMEM 培养基、乙醇（或异丙醇） (70% )、胎牛血清( FBS )、HBS 溶液(2X)、HEPES (2.5mmol/L, pH 7.3)、OptiMEM+ 1 ％青霉素／链霉素( P/S )、OptiMEM , 无P/S、pCMVDΔR8.91 质粒、pUMVC 质粒、pVSV- G 质粒 …
阅读更多 »悬浮细胞的siRNA转染实验步骤
悬浮细胞的siRNA转染操作步骤，以24孔板siRNA转染为例 1.提前1天细胞种植 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么就用2×105的细胞进行转染。 2.转染过程 ⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入一定量无血清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为25μ …
阅读更多 »体内转染（Entranster）与TAT和小鼠下丘脑运动及昼夜节律基因表达研究
反式激活子（Transactivator，Tat），HIV-1的调节蛋白，可促进HIV病毒快速复制，在HIV-1感染中起着非常重要的作用。对TAT蛋白功能的研究主要集中在抑制免疫系统、促进血管内皮细胞生长和神经系统损伤方面。迄今为止，很少有研究涉及Tat在昼夜节律中的作用。现分享一篇体内转染（Entranster）与TAT和小鼠下丘脑运动及昼夜节律基因表达研 …
阅读更多 »为什么选择AAV作为基因治疗的病毒载体？
AAV，即腺相关病毒载体，属于细小病毒科依赖病毒属。野生型AAV感染人宿主细胞后，可以整合到人类19号染色体的AAVS1位点，但AAV不会引起人类疾病。实际上，我们市面常见的AAV并不是野生型AAV，而是重组AAV（rAAV)。 AAV和AAV载体的基因组结构（图片来源：Semantic Scholar） 目前来看，rAAV相比较其他病毒载体，未发现 …
阅读更多 »动物实验系列篇章之三——实验动物的麻醉方法
麻醉(anesthesia)的基本任务是消除实验过程中所至的疼痛和不适感觉，保障实验动物的安全，使动物在实验中服从操作，确保实验顺利进行。 一、常用的麻醉药 (一)常用局部麻醉剂：普鲁卡因，此药毒性小，见效快，常用于局部浸润麻醉，用时配成0.5％～1％；利多卡因，此药见效快，组织穿透性好，常用1％～2％溶液作为大动物神经干阻滞麻醉，也可用0.25％～0.5％ …
阅读更多 »DNA转染与鞘磷脂合成酶2和H2O2诱导的内皮功能障碍研究
动脉粥样硬化（AS）是各种心脑血管疾病的主要病因，发病率和死亡率都很高。氧化应激诱导内皮细胞功能障碍是动脉粥样硬化的病理基础。此外，鞘磷脂和Wnt/β-连环素信号通路被认为与AS密切相关，但具体机制尚不清楚。 现分享一篇DNA转染（Entranster）与鞘磷脂合成酶2和H2O2诱导的内皮功能障碍研究的文献，以供参考。
阅读更多 »体内转染（entranster）与肿瘤防治药物及其应用研究
8-氧脱氧鸟苷三磷酸是一种能够在体内触发DNA突变的核苷酸。无论是在正常的代谢活动中，还是在外源性刺激下，细胞都会产生大量的活性氧和氧自由基，其中-oh是高度活性的，可以破坏生物大分子，如碳水化合物、核酸、脂类和氨基酸。现分享一篇体内转染（entranster）与肿瘤防治药物及其应用研究的文献，该文献中的发明涉及一种用于预防和治疗肿瘤的药物，尤其涉及8-氧代 …
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