英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
APS是一种全身性自身免疫性疾病，在持续存在APL的情况下，可引起妊娠疾病和反复的全身血管血栓形成，累及动脉和静脉血管。APL是一系列异质性磷脂结合体。临床相关APL包括狼疮抗凝剂（LA）、抗心磷脂（ACL）和抗β2GPI。APL与β2GPI之间的抗原反应过程是APS发病机制中的关键环节。但APL介导的流产和组织损伤的具体机制尚未得到充分研究。 …
阅读更多 »做慢病毒感染实验前，你需要哪些知识储备？
慢病毒载体的构建： 慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成，即包装成分和载体成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白；载体成分则与包装成分互补，即含有包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。将包装成分与载体成分的多个质粒共转 …
阅读更多 »动物体内转染需要哪些条件？
1.每次动物实验，需要准备什么东西，器材？ ①转染的核酸，如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor，也可以转染DNA。 ②转染试剂和动物。 ③进行注射的器材。 2.可以转染的核酸都有什么？细胞实验的核酸可以用吗？ 可以转染小片断RNA如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor，也可以转染DNA。进行体外细胞实验的核酸就可以。但要 …
阅读更多 »电穿孔转化感受态E.coli TG1细胞的制备
一、材料和试剂 恒温旋转式摇床 三角烧瓶（容量为1或2L） 50ml灭菌离心管 低温高速离心机 SB培养基 细菌培养用胰化蛋白胨 20g 细菌培养用酵母提取物 5g NaCl 0.5g 去离子水 950ml 250mmol/L KCl溶液 10ml 以5N …
阅读更多 »IFN-γ诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFs）铁死亡机制研究
文献：IFN-γ could induce ferroptosis in keloid fibroblasts by inhibiting the expression of serpine2 期刊：Cell Death Discovery 影响因子：6.1 实验意义 本研究揭示了IFN-γ通过调控serpine2-system Xc⁻轴诱导瘢痕疙瘩成纤维细 …
阅读更多 »如何通过电穿孔转染DNA？
试剂 运载 DNA l0mg/mL 细胞生长培养基 电穿孔缓冲液 指数生长的培养细胞 线性化或环状质粒DNA ( 1 ~ 5μg/μL , 溶于无菌去离子水） 磷酸盐缓冲液( PBS ) 胰岛素 设备 电穿孔杯 电穿孔仪器 血细胞计数器 组织培养皿或多孔培养板 组织培养瓶（75cm2） 方法 准备电穿孔用细胞。 对于贴壁细胞 电穿孔前一天，通过胰酶消化释放贴 …
阅读更多 »如何选择腺病毒、慢病毒、腺相关病毒？
病毒表达系统 腺病毒(Adenovirus) 慢病毒(Lentivirus) 腺相关病毒(Adeno-As sociate virus) 病毒基因组 双链DNA病毒 RNA病毒 单链DNA病毒 复制 条件复制 不可复制 条件复制 滴度 最高可达1012pfu/ml 最高可达109TU/ml 最高可达1012-13v.g/ml 感染细胞类型 感染分裂和不分裂细 …
阅读更多 »动物体内转染实验，局部注射，应如何取样观察结果？
运用动物体内转染试剂Entranster-in vivo进行动物体内转染实验时，由于局部注射容易造成药液分布不均，在注射的近端，药液浓度高，效果明细；远端，药液浓度低，效果低一些。所以，一方面，需要尽量将药液均匀覆盖全部靶组织，另一方面，后续实验取样时，在保证实验的情况下，尽量取注射区域附近的组织，不取或者少取药液覆盖差的组织，以增加实验效果。
阅读更多 »ECL发光液与精胺改善心肌梗死后的心脏功能障碍研究
精胺是一种天然多胺，在哺乳动物细胞中含量丰富，参与细胞生长、增殖和再生。最近，口服精胺补充剂可通过增强自噬通量对年龄相关的心脏功能障碍具有心脏保护作用。然而，精胺对心肌梗死（MI）后心肌损伤和心脏功能障碍的影响仍不清楚。现分享一篇ECL发光液（enlight）与精胺改善心肌梗死后的心脏功能障碍研究的文献，以供参考。 文献地址：https://b …
阅读更多 »测序正确是不是说明shRNA构建没有问题
测序正确是一个重要的验证步骤，但它不能完全说明shRNA构建没有问题。下面我会具体说明为什么。 测序正确说明了什么？ shRNA序列（包括发夹结构、目标序列）与设计一致： 如果你对构建后的质粒进行了Sanger测序，序列结果和你设计的shRNA完全一致，这说明你的克隆步骤（连接、转化等）是成功的。这意味着你至少在DNA水平上构建了正确的序列结构。 但这并不代 …
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