根据你的描述,GFP在第一天有很好的表达,但在第二天转染DNA质粒后,第三天绿色荧光消失,只有少数细胞有红色荧光。这可能涉及到几个不同的因素: 1. DNA质粒表达对GFP表达的抑制 高浓度DNA引起的翻译抑制:你已经电转过mRNA,然后再转DNA质粒,这可能引发细胞对大分子DNA的免疫反应,比如激活干扰素反应。这可能抑制了翻译,不仅影响红色荧光蛋白(DNA …
阅读更多 »成功转染siRNA的主要关键点有什么?
1.设计合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。siRNA的设计合成首先很重要,最优的设计可以用最小的工作浓度取得满意的沉默效果,减少副反应的发生。siRNA的设计可以通过检索,优先选用经过验证的siRNA或设计多对siRNA。需要强调的是,需要同时设置阴性对照以排除非特异沉默现象和阳性对照以确认整个实验体系的有 …
阅读更多 »体内转染(entranster)与Clock基因突变体通过抑制NFKB的乙酰化来促进骨关节炎研究
地球上生物的生理活动维持着大约24小时的昼夜节律,这是由核心昼夜节律基因家族调控的。核心昼夜节律钟由许多调节因子组成,如时钟和bmal1,它们形成一个异二聚体,并有助于下游基因的激活。或者,一些调节因子(如per/cry)通过抑制时钟/bmal1活性来调节昼夜节律。这种转录翻译反馈是由核心昼夜节律分子介导的,并产生昼夜节律。现分享一篇体内转染(entrans …
阅读更多 »DNA转染与基于de novo设计蛋白DS119的TNFa结合蛋白合理设计研究
蛋白质-蛋白质相互作用的合理设计是创造新型蛋白质药物、诊断探针或调节细胞信号通路的有力工具。SH3和PDZ结构域等小型模块化支架在调节蛋白质相互作用中起着重要作用,因此这些结构域在蛋白质设计中的应用已被广泛研究。De novo蛋白质设计为工程定制蛋白质功能提供模板,为合成生物学研究提供正交蛋白质相互作用网络。已经开发出各种计算方法来引入已知蛋白 …
阅读更多 »难治性癌症溶瘤病毒临床试验研究(IF66.85)
标题 Hyperacute rejection-engineered oncolytic virus for interventional clinical trial in refractory cancer patients (用于难治性癌症患者介入临床试验的超急性排斥反应工程化溶瘤病毒) 影响因子 IF = 66.85(Cell 期刊的2023年影响因 …
阅读更多 »怎样做好siRNA细胞转染实验
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮 …
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与IL-17下调小鼠胶原性关节炎嗅间充质干细胞的免疫抑制能力研究
嗅间充质干细胞(OE-MSCs)是嗅觉固有层中一种新的常驻干细胞类型。OE-MSCs通过调节T细胞的反应,包括调节性T细胞(Treg)的上调和Th1/Th17细胞的下调而发挥其免疫抑制能力。作为炎性细胞因子,IL-17在胶原诱导性关节炎(CIA)的发展过程中起着关键的作用。然而,目前尚不清楚IL-17水平的升高是否会影响OE-MSCs在炎症状态下的免疫抑制功 …
阅读更多 »转染荧光效果良好,但是24小时qpcr没有敲低,是要延长收样时间吗?
这是个很实际的问题。在转染实验中,荧光标记良好说明转染效率高,但如果qPCR在24小时没有观察到预期的基因敲低效果,可能存在以下几种情况: 1. 延长收样时间可能是一个方向 有些siRNA或shRNA介导的敲低效果在48小时甚至72小时后才会明显,因为: mRNA的半衰期可能较长; 敲低并不等于马上降解已有的mRNA; 目标蛋白的表达也可能滞后。 建议: 设 …
阅读更多 »miRNA转染(Entranster)与骨髓细胞分化研究
免疫细胞系的规范和功能受祖细胞起源和环境因素的影响。免疫细胞如中性粒细胞、单核细胞和髓系抑制因子,其在炎症环境中的分化机制尚未完全阐明。现分享一篇RNA转染miRNA(Entranster)与骨髓细胞分化研究的文献,以供参考。
阅读更多 »DNA转染(Entranster)与线粒体介导的先天性免疫反应研究
宿主细胞的模式识别受体可以检测到微生物感染进而诱导先天免疫反应以激活宿主防御系统对抗入侵微生物,现分享一篇DNA转染(Entranster-H4000)与线粒体介导的先天性免疫反应研究的文献,指出果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)是抗病毒天然免疫反应的负调节因子和抗病毒药物的新靶点。
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