分子生物学

荧光淬灭是Western Blot发光时常见的现象，即加ECL发光液后立刻可以看到很明显的亮光，但亮光很快就消逝了，压完片后条带却很弱，甚至没有条带，发生这种情况的原因可能有以下几个方面: 1. 抗体浓度太高，局部过多的HRP会快速消耗底物，导致荧光信号过强，条带呈灼烧样。可降低抗体上样量。 2. 抗体浓度太低，荧光信号太弱，可能第一次压片能够获得很弱的条带 …

通常在进行慢病毒感染后，建议遵循以下操作步骤： 感染后观察细胞状态：感染后一般在48-72小时内可以看到较为明显的表达，但是否开始筛选需要看细胞的状态和感染效率。如果细胞长满了，可以考虑先进行传代，以避免细胞过度拥挤影响生长和感染效果。 喷霉素筛选的时机：喷霉素通常在感染后48-72小时开始筛选，但实际开始筛选的时间取决于感染效率和细胞状态。如果细胞感染后状 …

脑和肌肉芳烃受体核转位蛋白1（BMAL1）是昼夜节律振荡的核心成分，参与了许多生理活动。越来越多的证据表明BMAL1在生殖生理学中发挥着重要作用。 2022年3月2日，Yin Jiang 等人在Front Endo-crinol（Lausanne）上发表了一篇题为Critical Roles of the Circadian Transcription Fa …

下面程序描述了使用修饰染料核苷酸，用同步DNA 切割通过缺口翻译制备荧光DNA，缺口翻译是通过摸索修饰dUTP 和dTP 的荧光素或花青的最佳条件完成的(Keller 1993; Yu et al. 1994; Zhu et al. 1994) 。该方法对用四甲基罗丹明、德克萨斯红、香豆素和bodipy 修饰的核苷酸可能也适用，但染料的类型、接头、核苷酸以及 …

特异性差，出现杂带或非特异条带的原因可能有以下几个方面： 1. 蛋白上样量过大。可降低蛋白上样量。 2. 一抗是多克隆抗体，或一抗、二抗浓度太高。可更换成单克隆抗体，或降低抗体浓度，缩短抗体孵育时间，优化一抗和二抗的使用浓度。 3. 洗膜不充分。可增加洗膜次数和Buffer用量，延长洗膜时间，或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20 …

在植物以及大多数真菌、非哺乳动物及其细胞系中，应用外源性长链dsRNA或者表达长反向重复RNA 转录物能够诱发细胞内相应mRNA 的降解(Fire et al 1998; Kennerdell and Carthew 1998; Misquitta and Paterson 1999) 。哺乳动物卵母细胞和dsRNA 诱导干扰素反应缺失的哺乳动物细胞系中，长 …

分子信标(molecular beacon)是一种具有发夹结构的新型荧光标记核酸探针，具有高灵敏度、高特异型，其在聚合酶链反应（PCR）、核酸序列的分析、活细胞内核酸的动态检测、蛋白质(酶)与核酸的相互作用等方面具有广泛的应用。 分子信标的结构 分子信标的结构一般包括三个部分：环状区、信标茎干区、荧光基团和猝灭基团。荧光基团一般联接在信标分子的5 端；猝灭基 …

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。 在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体 …

Western Blot发光经常有“背景太高”问题，导致“背景高”的原因有很多，主要有以下几个方面： 1. 抗体浓度过高，洗涤不充分，可以造成抗体在膜上的非特异结合，导致高背景。可通过降低抗体稀释度，增加洗膜次数和Buffer用量，或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20加以改善。 2. 封闭不充分，会造成抗体在膜上的非特异结合，导 …

质粒DNA提取的方法很多，有碱变性法、羟基磷灰石柱层析法、溴化乙锭 – 氯化铯梯度超离心法等。本次实验是一种小量快速提取法。小量快速提取法也有多种，但基本原理和步骤是一致的．包括以下步骤：(1)裂解菌体细胞；(2)质粒和染色体DNA的分离；(3)除去蛋白质。RNA及其他影响限制性酶活性的细胞成分；(4)除去提取过程中使用的去垢剂、盐等。 一、原理 …