2024年 4月 16日, 星期二
新闻

分子生物学

微型凝胶电泳后使用溴化乙锭(EB)估算条带中DNA 数量

此方案概述了一个快速定量DNA 的方法,并同时分析其物理状态。溴化乙锭染色后,用UV 灯照射透视法可以发现包含>5ngDNA 的DNA 条带。CCD 照相机拍下未知样品的影像,然后与一系列已知含量标准品进行强度(灰度)对比,从而估计未知样品中DNA的含量。染色凝胶分析是一种快速的同时测量DNA 的数量并分析其物理状态的方式。 SYBR 染料也可用于染色并大致 …

阅读更多 »

测序胶的灌制、电泳及处理

推荐用6 %丙烯酰胺、非梯度胶为起点。可使用两种胶:一种在相对短的时间获得较短的寡核苷酸信息;另一种是用较长时间以使较长的寡核苷酸得到最大限度的分离。这两种凝胶分离过程,采用6 %丙烯酰胺,可以从一套测序反应中获得300~350 个碱基的序列信息。另一种可选的方案是使用两种不同浓度的胶,使较短片段和较长片段的寡核苷酸得到最大限度的分离。 材料 盛于喷射洗瓶的 …

阅读更多 »

移液过程中的无菌操作

使用可重复使用的玻璃移液管 可重复使用的移液管通常放置在金属桶中。要用于细胞或细菌实验,移液管必须用棉花塞住。 将小桶的盖子拧松(用左手的最后两个手指打开和夹住。) 左手拿住小桶,右手卸掉盖子。 用火烧一下盖子和小桶的开口处,把盖子放在小桶的旁边。 左手水平拿好小桶,轻轻摇动, 使一两根移液管的头部露出一点,方便抓取。 取出一根移液管,把小桶放好。拿出移液管 …

阅读更多 »

影响western-blot实验的因素有哪些?

1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量,蛋白变性是否充分等等,还有,蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外,蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的要求较高,分离胶的PH值应在8.8左右,而浓缩胶的PH应在6.8左右,最好不要差过0.5个PH单位,因为 …

阅读更多 »