英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
分子克隆最基础的操作可能就是核酸纯化了。去除蛋白质的关键步骤经常是简单地利用酚：氯仿和氯仿把DNA 从水相中萃取出来。这种萃取可在进行一步法克隆操作前有效灭活和去除蛋白酶。然而，如果是从复杂分子混合物如细胞裂解液中纯化DNA 时，则需要更多的检测。在这些情况下， 一般是在用有机溶剂萃取前，利用蛋白质水解酶如链霉菌蛋白酶或蛋白酶K （表1 ) 去除大部分蛋白质 …
阅读更多 »南京中医药大学：忍冬苷靶向EZH2减轻溃疡性结肠炎通过自噬介导NLRP3炎性体失活
结肠巨噬细胞内NLRP3炎症小体的异常激活与溃疡性结肠炎的发生发展密切相关。虽然靶向NLRP3炎症小体被认为是一种潜在的治疗方法，但其调节肠道炎症的潜在机制仍存在争议。 2021年3月9日，发表于Acta Pharmaceutica Sinica B（影响因子11.413）的一篇题为Lonicerin targets EZH2 toalleviate ulc …
阅读更多 »蛋白质的保存方法如何选择？
保存方法的选择取决于几个因素，包括蛋白质内在的稳定性、所需的保存时间的长短和对于防止破坏所要求的程度。这些因素有很大的变异性，但是，在大多数情况下都应当遵守以下常规的准则。 如果仅仅是要将小批量的纯化蛋白质保存约几天的时间，那么通常只要以非冷冻的溶液形式4°C保存即可，如果需要保存较长的时间，或如果有明显的蛋白质降解（如可见的沉淀物或不可接受的功能损失），那 …
阅读更多 »佛手柑素（BM）或可被开发成预防骨质疏松症的食品成分或补充剂
骨质疏松症是最常见的骨骼疾病之一，严重影响老年人的健康和生活质量。成骨细胞分化和骨形成的减少导致骨量和微结构的变化，使骨骼容易发生骨折。佛手柑素（BM）是一种来自各种柑橘类水果的天然化合物，具有多种生物活性，包括抗脂肪生成的功能 2022年1月30日，发表于Food &Function的一篇题为Bergamottin promotes osteobl …
阅读更多 »14-3-3蛋白家族与精神分裂症
精神分裂症是一种使人衰弱的精神障碍，影响着世界上大约1%的人口，但人们对这种疾病并不是十分了解。精神分裂症的遗传学是非常异质的，因此很难确定可能导致这种疾病的具体改变。然而，越来越多来自人类研究的证据表明，14-3-3家族的改变与精神分裂症之间存在联系。 2022年3月14日，发表于Frontuers in Molecular Neuroscience 的一 …
阅读更多 »常用电泳缓冲液的配制方法
缓冲液 使用液 浓贮存液（每升） Tris-乙酸（TAE） 1×：0.04mol/L Tris-乙酸 50×：242g Tris 碱 0.001mol/L EDTA 57.1ml 冰乙酸 100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-磷酸（TPE） 1×:0.09mol/L Tris-磷酸 10×:10g Tris 碱 0. …
阅读更多 »蛋白质凝胶电泳注意事项
大多数蛋白质凝胶电泳是还原性条件下的十二烧基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE) 。 ＊样品准备 还原试剂2－巯基乙醇或者二硫苏糖醇加在变性胶的样品缓冲液中，还原蛋白质中的二硫键，确保蛋白质维持在测定分子量所需的无规则卷曲状态。 样品缓冲液分成小管，贮于－20℃ 。甘油浓度很高，足以防止样品冻结，所以不必担心冻融所造成的损伤。当管中没有还原试剂的味 …
阅读更多 »师姐真传的一些引物设计技巧（师姐比师兄靠谱）
实验室小白遇上引物设计，一片迷茫，不知所措。 师姐：现在常用的的引物设计软件有Oligo、PrimerPremier、DNA man等等，还有在线引物设计软件。咱实验室的软件给你拿去。 （师姐比师兄靠谱，真的是手把手的教了，边操作边讲解。） 1. 在NCBI上搜索到该基因，找到该基因的mRNA，在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的origin中 …
阅读更多 »离心机的种类
有很多关于离心机类型的描述性术语，但那些不是严格的定义。在实验室中，离心机通常以制造者的名字相称。 高速与超速离心机都带有冷冻装置，之所以需要冷冻是因为高速离心会产生热。其他离心机有带或不带冷冻装置的型号。 台式离心机， 也称为多用途离心机。不一定放在实验台上，反而经常放在桌子底下。 用途：沉淀细胞与细菌、酚抽提。 g 值与每分钟旋转次数： 角式17000 …
阅读更多 »western-blot化学发光（ECL）出现高背景是什么原因？
做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现，要弄清楚“背景太高”的原因，先要知道“背景”是什么，“背景”也是发光，影响发光的因素就会影响背景。 影响发光的因素主要有：1.含HRP的抗体；2.发光试剂；3.和发光试剂反应的杂质，如含杂质的膜。这里面，在很短时间内曝光造成的背景多是由于含HRP的抗体的因素造成的，抗体浓度过高，洗涤不充 …
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