2023年 1月 30日, 星期一
新闻

分子生物学

PCR实验最常见的9个问题及解决方案

1. 如何有效设计引物 (1)使用Oligo或Primer设计引物,在保守区内设计,长度一般在18-27bp,上下游引物Tm值最好是60-75℃,GC含量=40%-60%,引物自身及引物之间不应存在互补序列,避免发夹结构。 2. PCR电泳无扩增条带 (1)酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活,往往通过更换新酶或用另一来源的 …

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早期游泳对Shank3基因敲除的自闭症大鼠模型的行为和纹状体转录组的影响

自闭症谱系障碍(ASD)是一种发育障碍,其特点是在儿童期有社会行为缺陷和刻板行为,至今仍缺乏令人满意的医疗干预。早期游泳干预是一种非侵入性的方法,结合了丰富的环境和运动,已被证明可以改善幼儿的大脑发育和治疗神经发育疾病。 2022年3月31日,Yunchen Meng等人在 Neuropsychiatr Disease and Treatment上在线发表题 …

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如何制备双链siRNA?

本方案介绍如何将合成的siRNA 有义链和反义链复性形成双链siRNA, 以及利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对双链siRNA 进行分析。 试剂 丙烯酰胺: 双丙烯酰胺(19 : 1, 40%, m/V)过硫酸铵( 10%, m/V) 复性缓冲液(10 X ) 2‘ 脱保护缓冲液[100 mmol/L 乙酸,用四甲基乙二胺( TEMED) 调整pH …

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离心机的种类

有很多关于离心机类型的描述性术语,但那些不是严格的定义。在实验室中,离心机通常以制造者的名字相称。 高速与超速离心机都带有冷冻装置,之所以需要冷冻是因为高速离心会产生热。其他离心机有带或不带冷冻装置的型号。 台式离心机, 也称为多用途离心机。不一定放在实验台上,反而经常放在桌子底下。 用途:沉淀细胞与细菌、酚抽提。 g 值与每分钟旋转次数: 角式17000 …

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影响western-blot实验的因素有哪些?

1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量,蛋白变性是否充分等等,还有,蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外,蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的要求较高,分离胶的PH值应在8.8左右,而浓缩胶的PH应在6.8左右,最好不要差过0.5个PH单位,因为 …

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DNA的乙醇沉淀

沉淀DNA 样品能达到浓缩的目的,而且沉淀也会去除阻止许多酶反应的残留氯仿。 一、步骤 于最多体积450 μl 的DNA 样品中,加入1/10体积pH4.2的3 mol/L NaAc, 快速颠倒以混匀。 加入2倍体积95%乙醇或无水乙醇,充分混匀。 样品踩于冷环境中沉淀:-20℃ 过夜,或-70℃30 min, 或干冰中5 min 。 使用干冰进行乙醇沉淀 …

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分子克隆中常用的其他酶

一、DNA 聚合酶 分子克隆中的许多步骤都涉及在DNA 聚合酶催化下的DNA 体外合成反应。这些酶作用时大多需要模板,合成产物的序列则与模板互补。大多数聚合酶优先作用于DNA 模板,但也可拷贝RNA ,尽管这时效率较低。最常用的依赖于DNA 的DNA 聚合酶是大肠杆菌DNA 聚合酶 I (全酶)、大肠杆菌DNA 聚合酶I 大片段(Klenow 片段)、T4 …

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DNA 序列测定——双脱氧( Sanger ) 测序法

双脱氧法或酶法利用DNA 聚合酶合成单链DNA 模板的互补拷贝,这一方法最先由F. Sanger 及其合作者发展而来。DNA 聚合酶不能起始DNA 链的合成,而是在复性于“模板“DNA 的引物的3 ‘端上进行链的延伸(图1) 。链的延伸是在引物生长端的3′ 羟基掺入脱氧核糖核苷酸。双脱氧测序法利用了DNA 聚合酶能以2′, …

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单克隆抗体制备中的免疫接种

材料靶抗原: 表达于细胞的抗原,或蛋白质、多肽生理盐水无血清培养基:仅用于细胞接种弗氏完全佐剂(complete Freunds adjuvant, CFA)实验动物: 无病原体大鼠、小鼠或仓鼠弗氏不完全佐剂(incomplete Freunds adjuvant, IFA)1~2ml玻璃注射器(有Luer-Lok 接头,已消毒)三通管100ml 烧杯20G …

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