2022年 10月 4日, 星期二
新闻

分子生物学

实时荧光定量PCR为什么倍受青睐?

一、 实时荧光定量PCR技术是一种新型的科学定量方法,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。   该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前已得到广泛应用。 二、 目前,荧光定量PCR所使 …

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Northern Blot原理及所需仪器、试剂

一、原理:在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳,继而将在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上,固定后再与同位素或其它标记物标记的RNA探针进行反应。 用途:检测样品中是否含有基因的转录产物(mRNA)及其含量。 二、仪器与试剂 仪器:  恒温水浴箱,电泳仪,凝胶成像系统,真空转移仪,真空泵,UV交联仪,杂交炉,恒温摇床,脱色摇床,漩涡振荡器 …

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cDNA文库构建分为哪些阶段?

cDNA文库不同于基因组文库,被克隆DNA是从mRNA反转录来源的DNA。cDNA组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列。从而做cDNA克隆时应是先从获得mRNA开始,在此基础上,通过反转录酶作用产生一条与mRNA相互补的DNA链,然后除掉mRNA,以第一条DNA链为模板复制出第二条DNA链(双链);再进一步把此双链插入原核或真核载体。 cDNA文库的构建 …

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2022的七大热点技术: 靶向基因治疗、空间多组学……

1.完全基因组 在去年5月发表的预印本中,人类共有基因组序列 GRCh38 添加了近 2 亿个新碱基对,并撰写了人类基因组的最后一章。 GRCh38 于 2013 年首次发布,一直是一个有价值的工具,但也存在漏洞。主要是因为测序技术产生的读数准确但较短。它们的长度不足以明确地绘制出高度重复的基因组序列,包括覆盖染色体末端的端粒和在细胞分裂过程中协调新复制的 …

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实验室最常用的移液枪你用对了吗?

移液枪对我们医药生物研究人员来说是最熟悉不过了。可是,你真正了解它吗?你的使用方式是正确的吗?相信不少人听到这个问题后,已经开始回想自己平时的操作,也有一部分人在认真考虑答案了吧。细节决定成败,今天在这里跟大家普及一下移液枪的使用规程,希望对大家以后的实验有帮助。 一、移液枪的使用规程 1. 移液枪的放置 移液枪要放在支架上 2. 样品准备 要求液体温度与吸 …

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PCR 标记DNA

PCR 是通过热稳定酶,在模板、dNTPs 和一组与片段3′ 序列互补的引物存在下,对插入物进行次序扩增(Saiki et al. 1988) 。PCR 技术提供的另一优势是在对插入片段的扩增中掺入修正的核苷酸,因此可以生产出不含载体的标记的探针,这排除了在其他方法如缺口翻译所导致的对载体序列的非特异性标记。 目前已有掺入生物素化核苷酸的方法(L …

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转子的类型及用途

转子主要有4 种类型:角式、外摆式、连续流式以及区带式。只有角式与外摆式转子是标准的实验室仪器,另外两种只用作专门用途。 角式转子 用途:样品浓缩。实验室中的“苦力” 。 说明:样品沿着与旋转平面成一定角度的方向离心。 优点:离心见效最快。物质具有更高的相对离心力,比在外摆式转子中沉降快。机器的活动组件少,损坏机会小。 缺点:物质被驱向离心管的管壁方向,然后 …

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实时荧光定量PCR实验步骤

1、样品RNA的抽提 ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时 …

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佛手柑素(BM)或可被开发成预防骨质疏松症的食品成分或补充剂

骨质疏松症是最常见的骨骼疾病之一,严重影响老年人的健康和生活质量。成骨细胞分化和骨形成的减少导致骨量和微结构的变化,使骨骼容易发生骨折。佛手柑素(BM)是一种来自各种柑橘类水果的天然化合物,具有多种生物活性,包括抗脂肪生成的功能 2022年1月30日,发表于Food &Function的一篇题为Bergamottin promotes osteobl …

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真空浓缩仪的使用方法

  如果在乙醇沉淀后,核酸中还残留乙醇,就很难用水或缓冲液溶解沉淀。如果你急用或者需要去除大体积的挥发性液体,可以使用真空浓缩设备。真空浓缩设备由离心机、真空泵、加热器和冷凝装置组成,其组合模式多种多样,相关的实验室使用规则变化更多。 一、步骤 使用真空浓缩设备前至少30min 打开冷凝装置。在有些装置中,可能需要加入干冰。 打开真空泵。 开通风管以释放离心 …

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