分子生物学

一、Real-time qPCR定量方法 可以分为绝对定量和相对定量。 绝对定量是用一系列已知浓度的标准品制作标准曲线，在相同的条件下目的基因测得的荧光信号量同标准曲线进行比较，从而得到目的基因的量。该标准品可以是纯化的质粒DNA，体外转录的RNA，或者是体外合成的ssDNA。 相对定量可以分为比较Ct法和其他一些相对方法。比较Ct指的是通过与内参基因Ct值 …

骨质疏松症是最常见的骨骼疾病之一，严重影响老年人的健康和生活质量。成骨细胞分化和骨形成的减少导致骨量和微结构的变化，使骨骼容易发生骨折。佛手柑素（BM）是一种来自各种柑橘类水果的天然化合物，具有多种生物活性，包括抗脂肪生成的功能 2022年1月30日，发表于Food &Function的一篇题为Bergamottin promotes osteobl …

乙醇沉淀RNA通常RNA 可以像DNA 一样沉淀。步骤1. 加入1/10 体积1 mol/L 的NaOAc (pH4. 8) 和2.5 倍体积冷的95 ％的乙醇。2.-20 ℃ 下沉淀过夜。3. 用70 ％的乙醇洗涤沉淀。注意：当你处理少量RNA 的时候（低于5 μg) ，在RNA 沉淀之前加入一些载体或者共沉淀物，这类物质将帮助沉淀RNA, 更容易看见沉淀 …

siRNA（small interfering RNA, 小干扰RNA）并不是从牵牛花的过表达现象中发现的，而是从研究植物基因沉默和RNA干扰现象中逐步发展起来的。siRNA的发现归功于对基因沉默和RNA干扰机制的研究，尤其是科学家在植物、真菌和线虫等生物中对这些现象的观察和研究。 siRNA发现的关键研究 植物基因沉默：在植物中，科学家观察到特定基因可以在 …

表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液 　 不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml） 溶液成分 5 10 15 20 25 30 40 50 6% 水 2.6 5.3 7.9 10.6 13.2 15.9 21.2 26.5 30%丙烯酰胺溶液 1 2 3 4 5 6 8 10 1.5 mol/L Tris (pH …

当分离蛋白质时，包含有蛋白质的细胞和细菌须先被裂解。物理法裂解。利用各种机器来完成，例如：1. 氮气气穴弹。氮气解压是裂解真核细胞的一种温和方法，存在于一定压力下的氮气与细胞内的氮气达到平衡。释放压力时，溶液中产生的氮气和间歇的气泡导致单个细胞膜的破裂，但不再有进一步的细胞裂解发生，细胞器还是保持完整，而且氮气产生的压力和气温降低都会保护蛋白质不被降解。2. …

去除去污剂的可行性（根据Harlow 和Lane 1988) 离子型去污剂 用分子筛G25 柱子进行凝胶过滤，对于一些蛋白质来说，用低于临界微团浓度的另一种去污剂来平衡柱子。 加入8 mol/L 的尿素， 然后把去污剂加到离子交换柱上，让蛋白质在8 mol/L 的尿素中流动，再透析去除尿素。 对于离子型的去污剂，有一个相对较低的微粒大小和较高的临界微团浓度， …

蛋白质结构预测（Protein Structure Prediction）是一项利用计算方法预测蛋白质分子的三维结构的技术。由于蛋白质的功能很大程度上依赖于其三维结构，预测其结构对理解生物过程、药物设计等领域具有重要意义。然而，实验确定蛋白质结构（如X射线晶体学、核磁共振等方法）耗时费力，因此计算预测成为重要替代方法。 蛋白质结构预测的主要方法 同源建模（H …

以下是详细的优化建议： 优化质粒用量（首要调整）： 问题： 你目前使用的是3.5µL质粒加入90µL感受态细胞。关键在于质粒的浓度（ng/µL），而不是体积。 3.5µL 对于90µL感受态细胞来说体积不小，如果质粒浓度较高，实际DNA量可能大大超过电转最优范围。 原理： 过量的DNA会导致电击时产生过多的热量和离子效应，严重降低转化效率，尤其对大质粒（&g …

透析被用于从样品中除去盐和其他杂质，样品被放置在一个多孔的透析袋中，只允许比孔小的分子流出。透析袋被放在大体积的水或者缓冲液中，允许内容物外流，最后通过透析缓冲液把透析袋中的缓冲液取代。透析袋在使用前要洗净，所有的操作都要带手套。1. 根据合适的分子量截留选择透析袋。2. 准备透析袋，做成一个口袋，4’C 储存。3. 将透析袋放在一个大体积的烧杯 …