英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
在进行实验时，为了不损伤动物的健康，不影响观察指标，并防止被动物咬伤，首先要限制动物的活动，使动物处于安静状态，工作人员必须掌握合理的抓取固定方法。抓取动物前，必须对各种动物的一般习性有所了解。操作时要小心仔细、大胆敏捷、熟练准确、不能粗暴，不能恐吓动物，同时，要爱惜动物，使动物少受痛苦。 一、小鼠 小鼠性情较温顺，一般不会咬人，比较容易抓取固定。通常用右手 …
阅读更多 »动物实验系列篇章之一——实验动物的抓取和固定
RNAi、miRNA及siRNA的区别和联系
RNA干扰 （RNAi）：近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。 MicroRNA（miRNA,微RNA）： …
阅读更多 »G418筛选转染克隆的注意事项
G418作为稳定转染通用的一种筛选方式，在进行筛选前应该要注意几点： 1. G418的浓度：G418是一种氨基糖苷类似物，它通过干扰核糖体功能来阻止哺乳动物细胞蛋白质的合成。因此在筛选过程中G418的浓度将对转染细胞的筛选产生很大的影响。在筛选之前最好进行条件优化确定最佳筛选浓度。尽管文献有报道筛选浓度，最好还是要自己亲自做一下筛选浓度的确定。 2. …
阅读更多 »SDS-PAGE各实验试剂的配制
SDS-PAGE凝胶制备属于实验室最常规的操作了，刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方，这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。 1. 分离胶(12%) 配制 所需试剂 所需体积 分离胶(12％) 30％丙烯酰胺 6.0 ml 1.5 mol/l Tris-HCl 3.8 ml 10%SD …
阅读更多 »哪种RNA转染试剂效果更好？ Turbofect or EntransterTM-R4000？
近期，上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofect transfection reagent（Thermo）和 EntransterTM-R4000（Engreen）进行了一次RNA转染比较。比较情况如下： 实验方法 转染试剂：Turbofect transfection reagent（Thermo）和 EntransterTM-R4 …
阅读更多 »siRNA，shRNA，dsRNA，miRNA间的区别
RNA干扰（RNAi），即用20多个核苷 酸组成的短的双链RNA（siRNA）代替传统反义核酸进行转录后基因沉默，已经迅速而广泛地应用到基因功能，基因表达调控机制研究等热门领域，并为基因 治疗开辟了新的途径。近两年来，这方面的科学论文及报道爆炸性增长，几乎每天都有新的结果涌现。这些论文中，出现了很多与RNA干扰相关的概念，意思很相 近但并不完全相同，这里列举 …
阅读更多 »PCR实验最常见的9个问题及解决方案
1. 如何有效设计引物 （1）使用Oligo或Primer设计引物，在保守区内设计，长度一般在18-27bp，上下游引物Tm值最好是60-75℃，GC含量=40%-60%，引物自身及引物之间不应存在互补序列，避免发夹结构。 2. PCR电泳无扩增条带 （1）酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的 …
阅读更多 »WB发光检测中常见的问题及解决方法
免疫印迹试验（Western blot）是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法，被广泛应用于蛋白表达水平的研究、抗体活性检测和早期疾病诊断等多个方面。其中较为简单也为大家所普遍接受的Western blot显色方法为底物化学发光法ECL，文章根据发光检测中常见的几种问题现象与各位生物人一起探讨。疫印迹试验（Western blot）是分子生物 …
阅读更多 »Neuropharmacology | 治疗阿尔兹海默症的新视角
近日，中国药科大学姚文兵教授课题组在《Neuropharmacology》期刊上发表了“MicroRNA-23b attenuates tau pathology andinhibits oxidative stress by targeting GnT-III in Alzheimer’s disease”的研究论文，揭示了MicroRNA-2 …
阅读更多 »成功转染siRNA的主要关键点有什么？
1.设计合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。siRNA的设计合成首先很重要，最优的设计可以用最小的工作浓度取得满意的沉默效果，减少副反应的发生。siRNA的设计可以通过检索,优先选用经过验证的siRNA或设计多对siRNA。需要强调的是，需要同时设置阴性对照以排除非特异沉默现象和阳性对照以确认整个实验体系的有 …
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