2021年 12月 8日, 星期三

SDS-PAGE各实验试剂的配制

SDS-PAGE凝胶制备属于实验室最常规的操作了,刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方,这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。
1. 分离胶(12%)

配制 所需试剂 所需体积
分离胶(12%) 30%丙烯酰胺 6.0 ml
1.5 mol/l Tris-HCl 3.8 ml
10%SDS 150 μl
10%过硫酸铵 150 μl
TEMED 6 μl
蒸馏水 4.9 ml

2. 浓缩胶(5%)

配制 所需试剂 所需体积
浓缩胶(5%) 30%丙烯酰胺 1.3 ml
1.5 mol/l Tris-HCl 1.0 ml
10%SDS 80 μl
10%过硫酸铵 80 μl
TEMED 8 μl
蒸馏水 5.5 ml

3. 分离胶缓冲液(pH8.9)

配制 所需试剂 所需体积
分离胶缓冲液 Tris 36.6 g
1 mol/l HCl 48 ml
蒸馏水 补足至100 ml

4. 浓缩胶缓冲液(pH6.7)

配制 所需试剂 所需体积
浓缩胶缓冲液(pH6.7) Tris 5.98 g
1 mol/l HCl 48 ml
蒸馏水 补足至100 ml

5. 30%丙烯酰胺(pH≤7.0)

配制 所需试剂 所需体积
30%丙烯酰胺(pH≤7.0) 丙烯酰胺 29 g
甲叉-双丙烯酰胺 1 g
蒸馏水 补足至100 ml

6. 10%过硫酸铵(W/V):1g过硫酸铵溶于10ml水中,4℃保存数周,尽量现用现配。
7. 10%SDS:将10 g SDS溶于80ml重蒸水中并轻缓搅拌(室温低时需水浴加热溶解),再定容至100ml,室温存放。
8. 样品缓冲液

配制 所需试剂 所需体积
样品缓冲液 1 M Tris-HCl(pH6.7) 5 ml
SDS 2.5 g
巯基乙醇 1 ml
溴酚兰 0.05 g
蔗糖 10 g
蒸馏水 补足至100ml

9. 考马斯亮蓝染色液:0.25g考马斯亮蓝R-250用少量甲醇溶解后,用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀释至100ml。
10. Tris-甘氨酸电泳缓冲液(pH8.3)

配制 所需试剂 所需体积
Tris-甘氨酸 电泳缓冲液(pH8.3) Tris碱 15.1 g
甘氨酸 94 g
10%(W/V)SDS 50 ml
去离子水 补足至100 ml

凝胶配制所需试剂的母液不能放置太久,有条件的实验室可将母液保存在4度冰箱中,放置母液被微生物污染或者出现沉淀。

扫描二维码,随时阅读沟通。

英格恩技术的微信

推荐

细胞转染实验方法有哪些?

1. 脂质体法。中性脂质体是利 …

发表评论

您的电子邮箱地址不会被公开。 必填项已用*标注