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EntransterTM-in vivo体内转染试剂

EntransterTM-in vivo体内转染试剂

产品介绍

EntransterTM-in vivo是英格恩生物公司(Engreen Biosystem Co,Ltd.)最新研发合成的用于动物体内转染的转染试剂。EntransterTM-in vivo动物体内转染试剂可将小片断RNA如siRNA,miRNA,mimic、inhibitor或DNA转染到动物体内,在动物体内进行RNA干扰或蛋白表达实验。

EntransterTM-in vivo试剂不是病毒,改变了病毒转染方法复杂、周期长、不稳定、花费大、安全性等诸多问题。EntransterTM-in vivo转染效率高,方法简单,无需病毒包装,直接将DNA或RNA送入目的细胞的细胞核中表达。

EntransterTM-in vivo,非脂质体,采用纳米技术合成,能耐受体内复杂的环境,不产生免疫反应。

应用范围

专用于动物体内转染,可直接转染DNA或siRNA到动物体内进行:

  • 动物体内基因治疗研究
  • 动物体内RNA干扰研究
  • 动物体内蛋白功能研究

主要特点

  • 最快3天可以得到结果,核酸+转染试剂,注射动物,完成转染。
  • 肝、肾、心、肺,血液系统、神经系统、生殖系统、皮肤…成功应用。
  • 可方便、快捷更换不同的小片断RNA或DNA进行动物试验。
  • 方法先进,抛弃病毒,众多实验室应用,稳定可靠。
  • 比使用病毒节省90%以上费用,时间缩短到3天!

 

使用方法简单

如图1所示,只需要将核酸和转染试剂分别稀释,混合,无需过滤,即可直接注射动物。

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图1

转染效果

将EntransterTM-in vivo与Ambion in vivo siRNA(作用于凝血因子VII)和阴性siRNA通过尾静脉注射成年小鼠,2天后,取动物肝脏检测。在mRNA水平和蛋白水平观察干扰效果。见下图,图中最左侧组为对照组注射阴性siRNA为3mg/kg,后边3组为每kg动物注射阳性siRNA量分别为1mg/kg,2mg/kg和3mg/kg情况。

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             图2                                         图3

各器官转染

根据推荐用量注射EntransterTM-in vivo和Ambion in vivo siRNA(作用于Lamin A/C)和阴性siRNA到成年小鼠。注射后2天收集相应的组织,分离RNA,用qRT-PCR分析Lamin A/C基因的表达水平。图4为尾静脉结果,图5为各器官分别局部注射结果。

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图4                                   图5

应用本产品发表的部分文献

1.Biomed Res Int. 2014;2014:898646.Trichinella spiralis excretory-secretory products protect against polymicrobial sepsis by suppressing MyD88 via mannose receptor.(免疫系统)

2.Mol Cancer. 2014 Sep 6;13(1):206.Let-7d suppresses growth, metastasis, and tumor macrophage infiltration in renal cell carcinoma by targeting COL3A1 and CCL7.(肿瘤相关研究)

3.Cell Death Dis. 2014 Aug 21;5:e1382.Amyloid-β induces NLRP1-dependent neuronal pyroptosis in models of Alzheimer’s disease.(阿尔茨海默病)

4.Neurosci Lett. 2014 Mar 11.Autophagic effect of programmed cell death 5 (PDCD5) after focal cerebral ischemic reperfusion injury in rats.(凋亡相关研究)

5.Mol Immunol. 2014 Jan 21;59(1):30-38.Inhibition of IL-2 inducible T-cell kinase alleviates T-cell activation and murine myocardial inflammation associated with CVB3 infection.(心脏疾病)

6.Biochemistry (Moscow) 2014 Jan 12.Hepatitis B Virus Can Be Inhibited by DNA Methyltransferase 3a via Specific Zinc-Finger-Induced Methylation of the X Promoter(尾静脉注射DNA研究乙肝)

7.J Biol Chem. 2013 Oct 7.Heme Oxygenase-1 Exerts a Protective Role in Ovalbumin-induced Neutrophilic Airway Inflammation by Inhibiting Response in the Immune Cells Th17.(肺过敏性哮喘)

8.Journal of Neuroimmunology 2013 Oct 8.MicroRNA-155 Modulates Th1 and Th17 Cell Differentiation and is Associated with Multiple Sclerosis and Experimental Autoimmune Encephalomyelitis.(注射miRNA研究对免疫疾病的作用机理)

9.Journal of Alzheimer’s disease:JAD 2013 Sep 18.IL12/23 p40 Inhibition Ameliorates Alzheimer’s Disease-Associated Neuropathology and Spatial Memory in SAMP8 Mice.(脑室注射siRNA研究对阿耳茨海默氏病的治疗)

10.Purinergic Signal. 2013 Jun 11.Sensory-sympathetic coupling in superior cervical ganglia after myocardial ischemic injury facilitates sympathoexcitatory action via P2X7 receptor.(舌下静脉注射siRNA干扰脊神经背根神经节受体)

11.CNS Neurosci Ther. 2013 May 3.The Involvement of Programmed Cell Death 5 (PDCD5) in the Regulation of Apoptosis in Cerebral Ischemia/Reperfusion Injury.(脑室注射siRNA研究脑缺血的凋亡机理)

12.Matrix Biol. 2013 Mar 5.Transdermal siRNA-TGFβ1-337 patch for hypertrophic scar treatment.(皮肤涂抹siRNA研究治疗皮肤瘢痕)

13.J Cereb Blood Flow Metab. 2013 Jan 9.SirT1 mediates hyperbaric oxygen preconditioning-induced ischemic tolerance in rat brain. (脑室注射siRNA研究脑缺血机理)

14.Cancer Lett. 2012 Jan 28;314(2):223-31. Epub 2011 Oct 5.NIRF is frequently upregulated in colorectal cancer and its oncogenicity can be suppressed by let-7a microRNA.(皮下肿瘤注射miRNA研究治疗结肠癌)

15.BMC Infect Dis. 2012 Aug 6;12(1):177.Short hairpin RNA targeting 2B gene of coxsackievirus B3 exhibits potential antiviral effects both in vitro and in vivo.(尾静脉注射DNA研究治疗病毒性心肌炎)

16.Curr Pharm Des. 2012 Sep 25.MicroRNAs (miRNAs) in colorectal cancer: From aberrant expression towards therapy.

17.Progress in Modern Biomedicine 2010 Sep.Anti-Virus Research on Short Double-Stranded RNA in Mouse Models with Viral Myocarditis.

英格恩动物转染试剂和病毒感染比较

英格恩动物转染试剂 病毒感染
实验周期 最快3天就可以出结果 需要进行克隆、病毒包装等一系列实验,周期短则1个月,长则达数月。
灵活性 更换核酸简单,利于筛选。 更换核酸序列,需要重新构建和包装病毒,复杂而且费工费时。
效果 方法简单,实验环节少,尤其在转染小片断RNA方面,如:siRNA, miRNA, mimic, inhibitor等,有非常明确的效果,而且普通的用于细胞实验的RNA就可以,效果非常肯定。 理论上效果不错,但由于病毒实验环节较多,任何一个环节出问题都容易导致实验失败,而且失败后,不易查找原因。实际上很多实验室失败后,往往暂停或终止了动物实验,导致课题研究质量的降低。
持续时间 属于瞬时转染,单次转染效果持续7-14天,但可以通过多次注射维持转染效果 可以通过整合到基因组内长期发挥作用
费用 只花费几千元即可立即进行小规模预实验来确定动物实验效果。 进行预实验也需要花费数万元和数月包装病毒,环节多,易出错,不易成功。

EntransterTM-in vivo体内转染其他问题

1.每次动物实验,需要准备什么东西,器材?

①转染的核酸,如siRNA,miRNA,mimic、inhibitor,也可以转染DNA。

②转染试剂和动物。

③进行注射的器材。

2.可以转染的核酸都有什么?细胞实验的核酸可以用吗?

可以转染小片断RNA如siRNA,miRNA,mimic、inhibitor,也可以转染DNA。进行体外细胞实验的核酸就可以。但要求核酸高纯度。因为纯度直接影响转染效果,在同样剂量的情况下,高纯、高质量的核酸可比普通纯度的转染效果高几倍,而且不容易造成动物炎症反应和死亡。如果用通常质量的核酸用于体内转染,建议在保持转染试剂和核酸比例情况下,同步加大用量。

3.转染试剂和核酸需要使用多少?

请参考使用说明。

4.采用哪种注射途径比较好?

根据课题研究的不同,可以采用尾静脉注射,局部注射等方式。

5.注射后,试剂是如何在体内分布的,有特异性吗?

采用尾静脉注射,通过血液循环系统分布,没有特异性;通过局部注射,一般分布在局部。

6.试剂作用原理是什么?对动物有什么影响?

EntransterTM-in vivo体内转染试剂通过纳米技术合成,通过物理作用与核酸结合,浓缩包裹核酸,从而保护核酸免受免疫系统破坏,同时增强核酸进入细胞核中表达。不含任何动物来源成分,由于处于纳米尺度,粒径小,不易引起免疫反应,不影响动物和器官组织的功能,可以多次在同一动物注射。

7.转染效果如何检测?

一般根据课题研究要求进行,如果单纯检测转染效率,推荐用qRT-PCR方法和luciferase方法。还可根据研究,采用组织学和生理学,以及物理测量的方法进行。由于体内转染的复杂性,通常体外试验中常采用的转染GFP蛋白用荧光显微镜观察的方法,由于体内取出的组织材料背景高,检测较为困难。

  1. EntransterTM-in vivo什么时候推出来的?转染效果怎样?有哪些实验室应用?

EntransterTM-in vivo是2010年由英格恩公司研发推出的,虽然推出时间不长,但已有很多实验室应用,并陆续有很多高质量文献发表。转染效果非常好,尤其对小片断核酸(如siRNA,miRNA,mimic,inhibitor)的转染效果很好。目前应用的实验室,有美国、欧洲以及韩国、中国等许多国家的一流实验室。

 

局部注射的参考方法

1.局部注射的总注射剂量的确定

首先,必须确定局部注射的总注射量(最终注射量)。这个注射量可以根据文献,也可以通过实际操作来确定。实际操作过程中,一般采用多点注射,比如3点注射的方法。从不同方向进针,以药液覆盖全部靶组织为目标。

 

2.各组分剂量的确定

总注射剂量确定以后,比如通常直径1cm的皮下肿瘤,其最大注射剂量为50ul左右,那么,根据说明书比例,各组分相应如下:

RNA转染,50μl转染复合物的组成

50μl转染复合物 核酸 25μl (25μg)核酸
稀释液 12.5μl 10%葡萄糖溶液
转染试剂 12.5μl的转染试剂

 

DNA转染,50μl转染复合物的组成

50μl转染复合物 核酸 16.67μl (16.67μg)核酸
转染试剂 33.33μl转染试剂

 

这是通常的各组分用量,如果条件允许,也可以少用或者不用葡萄糖溶液,以增加药液的量,达到更好的效果。但需要注意的是必须维持核酸和转染试剂的比例,RNA转染为:1ug(RNA):0.5ul(RNA体内转染试剂)DNA转染为:1ug(DNA): 2ul(DNA体内转染试剂)

 

3.核酸的稀释溶液

不论是质粒还是RNA粉末,建议用纯水稀释,并配制成1ug/ul浓度最好。如果由于某种原因,采用其它溶液稀释,可能会有部分沉淀产生。少量沉淀在动物体内不影响转染效果。

 

4.局部注射后的取样问题

由于局部注射容易造成药液分布不均,在注射的近端,药液浓度高,效果明细;远端,药液浓度低,效果低一些。所以,一方面,需要尽量将药液均匀覆盖全部靶组织,另一方面,后续实验取样时,在保证实验的情况下,尽量取注射区域附近的组织,不取或者少取药液覆盖差的组织,以增加实验效果。

产品价格

Products Cat. No. Size Price
EntransterTM-in vivo RNA Transfection Reagent 18668-11-1 0.5ml 询价
EntransterTM-in vivo DNA Transfection Reagent 18668-11-2 0.5ml 询价

更多信息,欢迎联系英格恩:

电话:010-68489824,60535354

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Email:sales@engreen.com.cn

网址:www.engreen.com.cn

 

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