2026年 5 月 4日, 星期一
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Tag Archives: 英格恩

磷酸钙-DNA共沉淀法的原理和步骤

前些时间有微友在平台上咨询细胞转染的事项,并对一篇博客文章《为什么磷酸钙转染并不稳定?为什么磷酸钙转染并不经济?》比较感兴趣。在这里,对这位微友的疑惑进行更加全方位的了解,在此将磷酸钙转染的原理和步骤和大家分享,以供交流讨论。 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时,可使 DNA 附在细胞表面,这有利于细胞吞入摄取核酸,或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进 …

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Western blot实验最常见的10个问题及解决方案

1、Western Blot原理 Westernblot的原理是蛋白质在电力场的作用下,由大到小的进行排列,利用电泳进行分离和富集。拥有抗原表位的蛋白质分子被抗体(一抗)特异性识别并与之结合。在此基础上,酶或荧光标记的二抗识别并结合一抗,通过与底物反应显色来观察目的蛋白。 Westernblot显色的方法主要有以下几种:(1)放射自显影,(2)底物化学发光E …

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动物实验系列篇章之四——实验动物的除毛、给药方法

一、实验动物的除毛 在动物实验中,被毛有时会影响实验操作与观察,因此必须除去。除去被毛的方法有剪毛、拔毛、剃毛和脱毛等。 (一)剪毛法:剪毛法是将动物固定后,先用蘸有水的纱布把被毛浸湿,再用剪毛剪刀紧贴皮肤剪去被毛。不可用手提起被毛,以免剪破皮肤。剪下的毛应集中放在一容器内,防止到处飞扬。给狗、羊等动物采血或新生乳牛放血制备血清常用此法。 (二)拔毛法:拔毛 …

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细胞转染为什么不能加血清?

看过很多细胞转染的高手,在做真核细胞转染时,都是在把核酸和转染试剂的混合液加入细胞表面以前,将融合的细胞的含血清的培养液弃去,用无血清培养基清晰后再加入混合物,4-6h后再换含血清的培养基。这是为什么呢?为什么这些转染试剂要求不含血清呢? 传统的转染试剂有一定的细胞毒性,在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如,阳离子脂质体。带正电的脂 …

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Plos one 2015:肺癌细胞凋亡的调控——ENTPD5

肺癌是发病率和死亡率增长最快,对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高。 肺癌被认为是一种遗传性疾病,其中异常的内源性致病基因的表达造成基因组不稳定,增强肿瘤细胞的活力和侵袭性。尽管成功治疗原发性恶性肿瘤,仍有在1/4以上的术后患者复发、转移。 ENTPD5是一种内质网酶,水解UDP为UMP,促进蛋白的N …

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小鼠尾静脉注射技巧有哪些?

1.小鼠的固定 最好使用小鼠固定器,前部有气孔保证小鼠呼吸,后部可以将尾部拉出,不要让小鼠在固定器中有太多活动空间, 如空间较大,可加入一些填充物,防止小鼠在注射时乱动。 2.尾静脉的准备 可以将小鼠尾部在50℃左右温水浸浴2分钟,以扩张静脉。 3.尾静脉的选择 小鼠尾部有3条尾静脉。背部1天,两侧各1条。由于背部静脉较深,较细,一般选择侧面的2条。 4.注 …

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动物体内转染常见问题与解决方案

EntransterTM-in vivo体内转染试剂通过纳米技术合成,通过物理作用与核酸结合,浓缩包裹核酸,从而保护核酸免受免疫系统破坏,同时增强核酸进入细胞核中表达。不含任何动物来源成分,由于处于纳米尺度,粒径小,不易引起免疫反应,不影响动物和器官组织的功能,可以多次在同一动物注射。 一般情况下,核酸(μg)和EntransterTM-in vivo (μ …

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体内转染文章背后的故事

节省时间 河北医科大学附属二院的老师在临床实践中发现在多发性硬化症患者样本中有一个miRNA上调的现象。针对该miRNA的mimics很容易得到,怎么导入动物呢?他们想到了用英格恩动物体内转染试剂,将mimics与体内转染试剂混合后,尾静脉注射小鼠,几天后就可以观察结果,进行PCR,病理等研究,结果发现该miRNA的上调影响到一些免疫细胞的改变,从而导致多发 …

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