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一、实验动物的除毛 在动物实验中，被毛有时会影响实验操作与观察，因此必须除去。除去被毛的方法有剪毛、拔毛、剃毛和脱毛等。 (一)剪毛法：剪毛法是将动物固定后，先用蘸有水的纱布把被毛浸湿，再用剪毛剪刀紧贴皮肤剪去被毛。不可用手提起被毛，以免剪破皮肤。剪下的毛应集中放在一容器内，防止到处飞扬。给狗、羊等动物采血或新生乳牛放血制备血清常用此法。 (二)拔毛法：拔毛 …

1.小鼠的固定 最好使用小鼠固定器，前部有气孔保证小鼠呼吸，后部可以将尾部拉出，不要让小鼠在固定器中有太多活动空间， 如空间较大，可加入一些填充物，防止小鼠在注射时乱动。 2.尾静脉的准备 可以将小鼠尾部在50℃左右温水浸浴2分钟，以扩张静脉。 3.尾静脉的选择 小鼠尾部有3条尾静脉。背部1天，两侧各1条。由于背部静脉较深，较细，一般选择侧面的2条。 4.注 …

1.设计合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。siRNA的设计合成首先很重要，最优的设计可以用最小的工作浓度取得满意的沉默效果，减少副反应的发生。siRNA的设计可以通过检索,优先选用经过验证的siRNA或设计多对siRNA。需要强调的是，需要同时设置阴性对照以排除非特异沉默现象和阳性对照以确认整个实验体系的有 …

1.每次动物实验，需要准备什么东西，器材？ ①转染的核酸，如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor，也可以转染DNA。 ②转染试剂和动物。 ③进行注射的器材。 2.可以转染的核酸都有什么？细胞实验的核酸可以用吗？ 可以转染小片断RNA如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor，也可以转染DNA。进行体外细胞实验的核酸就可以。但要 …

近期，上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofect transfection reagent（Thermo）和 EntransterTM-R4000（Engreen）进行了一次RNA转染比较。比较情况如下： 实验方法 转染试剂：Turbofect transfection reagent（Thermo）和 EntransterTM-R4 …

细胞转染分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染外源核酸不整合到宿主染色体中，在短时间内在基因或蛋白水平产生较高的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。稳定转染是相对需要建立某些基因整合到染色体DNA的细胞系来说的，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B 磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选， …

麻醉(anesthesia)的基本任务是消除实验过程中所至的疼痛和不适感觉，保障实验动物的安全，使动物在实验中服从操作，确保实验顺利进行。 一、常用的麻醉药 (一)常用局部麻醉剂：普鲁卡因，此药毒性小，见效快，常用于局部浸润麻醉，用时配成0.5％～1％；利多卡因，此药见效快，组织穿透性好，常用1％～2％溶液作为大动物神经干阻滞麻醉，也可用0.25％～0.5％ …

RNA干扰（RNAi），即用20多个核苷 酸组成的短的双链RNA（siRNA）代替传统反义核酸进行转录后基因沉默，已经迅速而广泛地应用到基因功能，基因表达调控机制研究等热门领域，并为基因 治疗开辟了新的途径。近两年来，这方面的科学论文及报道爆炸性增长，几乎每天都有新的结果涌现。这些论文中，出现了很多与RNA干扰相关的概念，意思很相 近但并不完全相同，这里列举 …

做Western Blot发光实验经常有“淬灭”的情况发生，经常有朋友反映，加发光试剂后立刻可以看到很明显的亮光，可亮光很快就消逝了，压完片后，条带却很弱，甚至什么也没有。这种情况发生的原因是什么？ 要解释这种情况发生的原因，必须先了解ECL化学发光的原理。一般的发光试剂含鲁米诺和H2O2、发光增强剂等物质。发光试剂中的鲁米诺被HRP和H2O2氧化，产生荧光 …

前些时间有微友在平台上咨询细胞转染的事项，并对一篇博客文章《为什么磷酸钙转染并不稳定？为什么磷酸钙转染并不经济？》比较感兴趣。在这里，对这位微友的疑惑进行更加全方位的了解，在此将磷酸钙转染的原理和步骤和大家分享，以供交流讨论。 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使 DNA 附在细胞表面，这有利于细胞吞入摄取核酸，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进 …