2024年 3月 28日, 星期四
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Tag Archives: 英格恩

RNAi、miRNA及siRNA的区别和联系

RNA干扰 (RNAi):近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰(RNAi)。 MicroRNA(miRNA,微RNA): …

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实验室最常用的移液枪你用对了吗?

移液枪对我们医药生物研究人员来说是最熟悉不过了。可是,你真正了解它吗?你的使用方式是正确的吗?相信不少人听到这个问题后,已经开始回想自己平时的操作,也有一部分人在认真考虑答案了吧。细节决定成败,今天在这里跟大家普及一下移液枪的使用规程,希望对大家以后的实验有帮助。 一、移液枪的使用规程 1. 移液枪的放置 移液枪要放在支架上 2. 样品准备 要求液体温度与吸 …

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体内转染文章背后的故事

节省时间 河北医科大学附属二院的老师在临床实践中发现在多发性硬化症患者样本中有一个miRNA上调的现象。针对该miRNA的mimics很容易得到,怎么导入动物呢?他们想到了用英格恩动物体内转染试剂,将mimics与体内转染试剂混合后,尾静脉注射小鼠,几天后就可以观察结果,进行PCR,病理等研究,结果发现该miRNA的上调影响到一些免疫细胞的改变,从而导致多发 …

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如何上调或下调特定的miRNA?

miRNA通过与转录本的相互作用,关闭或抑制基因的表达。最近的研究表明它们影响了约三成的基因。miRNA在多个组织中差异表达,这就让表达图谱分析成为研究的重点。同时,miRNA的过表达和抑制也是近年来常用的研究方法。 然而,Peng Jin(埃默里大学) 我们使用RNA oligo和载体的方法。对于RNA oligo方法,我们采用类似siRNA双链的miRN …

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动物实验系列篇章之五——实验动物的采血法

实验研究中,经常要采集实验动物的血液进行常规质量检测、细胞学实验或进行生物化学分析,故必须掌握正确的采集血液的技术。采血方法的选择,主要决定于实验的目的和所需血量以及动物种类。 一、大鼠、小鼠的采血方法 (一)剪尾采血:需血量很少时常用本法,如作红、白细胞计数、血红蛋白测定、制作血涂片等可与此法。动物麻醉后,将尾尖剪去约5mm,从尾部向尾尖部按摩,血即从断端 …

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都说RNAi很容易降解,转染效率很低,是真的吗?

RNAi就是利用降解双链RNA的酶系统,人工引入一段和目标RNA互补的序列,这样,在细胞内形成双链RNA,诱发降解机制,使目标RNA降解,无法被进一步翻译。 在转染过程中,有人就在担心,dsRNA的稳定性是相对于单链RNA而言的!RNA怎么办? RNAi中,标准的非修饰的siRNA确实容易降解,这不仅在保存过程中,而且在转染过程中。对siRNA的降解,可以合 …

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动物实验系列篇章之四——实验动物的除毛、给药方法

一、实验动物的除毛 在动物实验中,被毛有时会影响实验操作与观察,因此必须除去。除去被毛的方法有剪毛、拔毛、剃毛和脱毛等。 (一)剪毛法:剪毛法是将动物固定后,先用蘸有水的纱布把被毛浸湿,再用剪毛剪刀紧贴皮肤剪去被毛。不可用手提起被毛,以免剪破皮肤。剪下的毛应集中放在一容器内,防止到处飞扬。给狗、羊等动物采血或新生乳牛放血制备血清常用此法。 (二)拔毛法:拔毛 …

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动物体内转染需要哪些条件?

1.每次动物实验,需要准备什么东西,器材? ①转染的核酸,如siRNA,miRNA,mimic、inhibitor,也可以转染DNA。 ②转染试剂和动物。 ③进行注射的器材。 2.可以转染的核酸都有什么?细胞实验的核酸可以用吗? 可以转染小片断RNA如siRNA,miRNA,mimic、inhibitor,也可以转染DNA。进行体外细胞实验的核酸就可以。但要 …

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如何选择稳定转染的筛选抗生素?

稳定转染和瞬时转染,细胞转染的步骤基本相同,只是在转染后的细胞处理会不一样。由于瞬时转染只能维持几天,故在转染12~72后就可以在蛋白或基因水平进行相应的检测了。稳转细胞系通常需要通过一些选择性标记反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。 通常构建的载体上有两个抗性基因,如,氨苄青霉素和新霉素。那么建立稳转细胞系时该用哪种抗生素来筛细胞呢? 很多真核表达质粒上都 …

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WB发光检测中常见的问题及解决方法

免疫印迹试验(Western blot)是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,被广泛应用于蛋白表达水平的研究、抗体活性检测和早期疾病诊断等多个方面。其中较为简单也为大家所普遍接受的Western blot显色方法为底物化学发光法ECL,文章根据发光检测中常见的几种问题现象与各位生物人一起探讨。疫印迹试验(Western blot)是分子生物 …

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