2024年 5月 23日, 星期四
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Tag Archives: 英格恩

Western blot实验最常见的10个问题及解决方案

1、Western Blot原理 Westernblot的原理是蛋白质在电力场的作用下,由大到小的进行排列,利用电泳进行分离和富集。拥有抗原表位的蛋白质分子被抗体(一抗)特异性识别并与之结合。在此基础上,酶或荧光标记的二抗识别并结合一抗,通过与底物反应显色来观察目的蛋白。 Westernblot显色的方法主要有以下几种:(1)放射自显影,(2)底物化学发光E …

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一个抑制脑中风的miRNA

MicroRNAs(miRNAs)是一类非编码小RNA,miRNAs能结合到靶基因mRNA的3’非翻译区诱导转录退化和/或抑制翻译。miRNA在多种病理生理过程中发挥着重要的作用。 Let-7c是最丰富且高度保守的miRNA。以往的研究表明,let-7c通过调节细胞增殖和细胞凋亡抑制癌细胞存活率。最近研究表明Let-7c是巨噬细胞极化的重要调节器。 Let- …

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什么是siRNA?

小干涉RNA(siRNA):是在RNA干涉过程中人工体外合成的小片段RNA,由约20个碱基对组成,包括5个磷酸盐,2个核苷和3个悬臂。 RNA干涉(RNAi)在实验室中是一种强大的实验工具,通过这种方式,利用具有同源性的双链RNA(dsRNA)诱导序列特异的目标基因的沉默,迅速阻断基因活性。SiRNA在RNA沉默通道中起中心作用,是对特定信使RNA(mRNA …

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转基因动物的那些事儿,想说你为什么这么难?

1980年底Gordon等人首次将克隆的基因注入小鼠受精卵原核,然后移植于假孕的母鼠输卵管,培育出第1个转基因动物。这种将外源性基因用实验方法插入动物生殖细胞的基因组而获得具有插入基因特性,并能正常繁衍的动物称为转基因动物 ( transgenicanimals)。转基因技术是生物学领域最新重大进展之一,已能渗透到生物学、医学、畜牧学等学科的广泛领域。转基因 …

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siRNA,shRNA,dsRNA,miRNA间的区别

RNA干扰(RNAi),即用20多个核苷 酸组成的短的双链RNA(siRNA)代替传统反义核酸进行转录后基因沉默,已经迅速而广泛地应用到基因功能,基因表达调控机制研究等热门领域,并为基因 治疗开辟了新的途径。近两年来,这方面的科学论文及报道爆炸性增长,几乎每天都有新的结果涌现。这些论文中,出现了很多与RNA干扰相关的概念,意思很相 近但并不完全相同,这里列举 …

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动物实验系列篇章之四——实验动物的除毛、给药方法

一、实验动物的除毛 在动物实验中,被毛有时会影响实验操作与观察,因此必须除去。除去被毛的方法有剪毛、拔毛、剃毛和脱毛等。 (一)剪毛法:剪毛法是将动物固定后,先用蘸有水的纱布把被毛浸湿,再用剪毛剪刀紧贴皮肤剪去被毛。不可用手提起被毛,以免剪破皮肤。剪下的毛应集中放在一容器内,防止到处飞扬。给狗、羊等动物采血或新生乳牛放血制备血清常用此法。 (二)拔毛法:拔毛 …

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动物实验系列篇章之一——实验动物的抓取和固定

在进行实验时,为了不损伤动物的健康,不影响观察指标,并防止被动物咬伤,首先要限制动物的活动,使动物处于安静状态,工作人员必须掌握合理的抓取固定方法。抓取动物前,必须对各种动物的一般习性有所了解。操作时要小心仔细、大胆敏捷、熟练准确、不能粗暴,不能恐吓动物,同时,要爱惜动物,使动物少受痛苦。 一、小鼠 小鼠性情较温顺,一般不会咬人,比较容易抓取固定。通常用右手 …

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转染用的质粒,你提对了吗?

老板天天催着要实验进展,是不是很郁闷?可是细胞不给力,是不是很忧郁?刚刚复苏的细胞长的挺好的,可是转染后,细胞状态莫名其妙就变差了,是不是很伤心?转染试剂毒性大,换转染试剂?结果还是一样,是不是很无奈?勉强收了一点点细胞,可是还不够做个western blot的,是不是很抓狂?实验总是不能顺利进行,找不到原因,是不是都要吐血了?没人给指点迷津,是不是心都要碎 …

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