英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
一、消化液的采集 (一) 唾液 1. 直接抽取法 在急性实验中， 可用吸管直接插入动物口腔或唾液腺导管抽吸唾液，此法非常简单，但从口腔抽吸唾液会有杂质混入。 2. 制造腮腺瘘法 在慢性实验中,收集狗的唾液，要用外科手术方法将腮腺导管开口移向体外，即以腮腺导管为中心，切成一直径约2～3cm的圆形粘膜片，将此粘膜片，与周围组织分开，穿过皮肤切口引到颊外,将带有导 …
阅读更多 »动物实验系列篇章之六——实验动物各种体液、骨髓的采集方法
siRNA，shRNA，dsRNA，miRNA间的区别
RNA干扰（RNAi），即用20多个核苷 酸组成的短的双链RNA（siRNA）代替传统反义核酸进行转录后基因沉默，已经迅速而广泛地应用到基因功能，基因表达调控机制研究等热门领域，并为基因 治疗开辟了新的途径。近两年来，这方面的科学论文及报道爆炸性增长，几乎每天都有新的结果涌现。这些论文中，出现了很多与RNA干扰相关的概念，意思很相 近但并不完全相同，这里列举 …
阅读更多 »WB发光检测中常见的问题及解决方法
免疫印迹试验（Western blot）是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法，被广泛应用于蛋白表达水平的研究、抗体活性检测和早期疾病诊断等多个方面。其中较为简单也为大家所普遍接受的Western blot显色方法为底物化学发光法ECL，文章根据发光检测中常见的几种问题现象与各位生物人一起探讨。疫印迹试验（Western blot）是分子生物 …
阅读更多 »Western blot实验最常见的10个问题及解决方案
1、Western Blot原理 Westernblot的原理是蛋白质在电力场的作用下，由大到小的进行排列，利用电泳进行分离和富集。拥有抗原表位的蛋白质分子被抗体（一抗）特异性识别并与之结合。在此基础上，酶或荧光标记的二抗识别并结合一抗，通过与底物反应显色来观察目的蛋白。 Westernblot显色的方法主要有以下几种：（1）放射自显影，（2）底物化学发光E …
阅读更多 »细胞转染为什么不能加血清？
看过很多细胞转染的高手，在做真核细胞转染时，都是在把核酸和转染试剂的混合液加入细胞表面以前，将融合的细胞的含血清的培养液弃去，用无血清培养基清晰后再加入混合物，4-6h后再换含血清的培养基。这是为什么呢？为什么这些转染试剂要求不含血清呢？ 传统的转染试剂有一定的细胞毒性，在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如，阳离子脂质体。带正电的脂 …
阅读更多 »siRNA转染后什么时候做qRT-PCR检测最好？
1.siRNA转染后什么时候做qRT-PCR检测最好？ siRNA的沉默效果是有时效性的，在最佳的时间点观察，会得到更加明显的沉默效果，这个时间点的确定不能以同一株细胞转染DNA的经验确定，因为一个是消耗mRNA，一个是产生mRNA。对转染siRNA，在核酸水平，转染后8-48小时，即可观察到mRNA水平的逐步下降，一般来说，转染后48小时进行qRT-PCR …
阅读更多 »Plos one 2015：肺癌细胞凋亡的调控——ENTPD5
肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高。 肺癌被认为是一种遗传性疾病，其中异常的内源性致病基因的表达造成基因组不稳定，增强肿瘤细胞的活力和侵袭性。尽管成功治疗原发性恶性肿瘤，仍有在1/4以上的术后患者复发、转移。 ENTPD5是一种内质网酶，水解UDP为UMP，促进蛋白的N …
阅读更多 »细胞转染应该什么时候加抗生素？
细胞转染分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染外源核酸不整合到宿主染色体中，在短时间内在基因或蛋白水平产生较高的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。稳定转染是相对需要建立某些基因整合到染色体DNA的细胞系来说的，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B 磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选， …
阅读更多 »Experimental immunology | 是什么在助长红斑狼疮？
中国西安交通大学医学院在最新的研究中首次表明：lncRNA MIAT 通过体内降解miR-222来上调 CFHR5 表达，增强狼疮疾病的活动，并在《Experimental immunology》期刊上发表了题为 “LncRNA MIAT enhances systemic lupus erythematosus by upregulating …
阅读更多 »体内转染文章背后的故事
节省时间 河北医科大学附属二院的老师在临床实践中发现在多发性硬化症患者样本中有一个miRNA上调的现象。针对该miRNA的mimics很容易得到，怎么导入动物呢？他们想到了用英格恩动物体内转染试剂，将mimics与体内转染试剂混合后，尾静脉注射小鼠，几天后就可以观察结果，进行PCR，病理等研究，结果发现该miRNA的上调影响到一些免疫细胞的改变，从而导致多发 …
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