近期,上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofect transfection reagent(Thermo)和 EntransterTM-R4000(Engreen)进行了一次RNA转染比较。比较情况如下: 实验方法 转染试剂:Turbofect transfection reagent(Thermo)和 EntransterTM-R4 …
阅读更多 »Western Blot化学发光(ECL)背景太高的原因?
做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现,要弄清“背景太高”的原因,先要知道“背景”是什么,“背景”也是发光,影响发光的因素就会影响背景。 影响发光的因素主要有:1.含HRP的抗体;2.发光试剂;3.和发光试剂反应的杂质,如含杂质的膜。这里面,在很短时间内曝光造成的背景多是由于含HRP的抗体的因素造成的,抗体浓度过高,洗涤不充分,封闭不 …
阅读更多 »动物实验系列篇章之六——实验动物各种体液、骨髓的采集方法
一、消化液的采集 (一) 唾液 1. 直接抽取法 在急性实验中, 可用吸管直接插入动物口腔或唾液腺导管抽吸唾液,此法非常简单,但从口腔抽吸唾液会有杂质混入。 2. 制造腮腺瘘法 在慢性实验中,收集狗的唾液,要用外科手术方法将腮腺导管开口移向体外,即以腮腺导管为中心,切成一直径约2~3cm的圆形粘膜片,将此粘膜片,与周围组织分开,穿过皮肤切口引到颊外,将带有导 …
阅读更多 »ECL发光液的趣事
时间:2015年8月的某天 地点:某生物公司研发部门 人物:研究的老师 英格恩销售代表 事件:几天前,某生物公司研发部门的一位老师打电话所要一瓶我们英格恩公司的ECL发光液。其实客户买我们的ECL发光液是再正常不过的了,因为在业界我们的ECL发光液还是小有名气的,每年也有几万瓶的销量,有的客户一次性能购买好几升。而且用过的客户反应,我们的ECL发光液效果稳定 …
阅读更多 »转基因动物的那些事儿,想说你为什么这么难?
1980年底Gordon等人首次将克隆的基因注入小鼠受精卵原核,然后移植于假孕的母鼠输卵管,培育出第1个转基因动物。这种将外源性基因用实验方法插入动物生殖细胞的基因组而获得具有插入基因特性,并能正常繁衍的动物称为转基因动物 ( transgenicanimals)。转基因技术是生物学领域最新重大进展之一,已能渗透到生物学、医学、畜牧学等学科的广泛领域。转基因 …
阅读更多 »磷酸钙-DNA共沉淀法的原理和步骤
前些时间有微友在平台上咨询细胞转染的事项,并对一篇博客文章《为什么磷酸钙转染并不稳定?为什么磷酸钙转染并不经济?》比较感兴趣。在这里,对这位微友的疑惑进行更加全方位的了解,在此将磷酸钙转染的原理和步骤和大家分享,以供交流讨论。 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时,可使 DNA 附在细胞表面,这有利于细胞吞入摄取核酸,或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进 …
阅读更多 »siRNA转染后什么时候做qRT-PCR检测最好?
1.siRNA转染后什么时候做qRT-PCR检测最好? siRNA的沉默效果是有时效性的,在最佳的时间点观察,会得到更加明显的沉默效果,这个时间点的确定不能以同一株细胞转染DNA的经验确定,因为一个是消耗mRNA,一个是产生mRNA。对转染siRNA,在核酸水平,转染后8-48小时,即可观察到mRNA水平的逐步下降,一般来说,转染后48小时进行qRT-PCR …
阅读更多 »Plos one 2015:肺癌细胞凋亡的调控——ENTPD5
肺癌是发病率和死亡率增长最快,对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高。 肺癌被认为是一种遗传性疾病,其中异常的内源性致病基因的表达造成基因组不稳定,增强肿瘤细胞的活力和侵袭性。尽管成功治疗原发性恶性肿瘤,仍有在1/4以上的术后患者复发、转移。 ENTPD5是一种内质网酶,水解UDP为UMP,促进蛋白的N …
阅读更多 »动物实验系列篇章之五——实验动物的采血法
实验研究中,经常要采集实验动物的血液进行常规质量检测、细胞学实验或进行生物化学分析,故必须掌握正确的采集血液的技术。采血方法的选择,主要决定于实验的目的和所需血量以及动物种类。 一、大鼠、小鼠的采血方法 (一)剪尾采血:需血量很少时常用本法,如作红、白细胞计数、血红蛋白测定、制作血涂片等可与此法。动物麻醉后,将尾尖剪去约5mm,从尾部向尾尖部按摩,血即从断端 …
阅读更多 »Neuropharmacology | 治疗阿尔兹海默症的新视角
近日,中国药科大学姚文兵教授课题组在《Neuropharmacology》期刊上发表了“MicroRNA-23b attenuates tau pathology andinhibits oxidative stress by targeting GnT-III in Alzheimer’s disease”的研究论文,揭示了MicroRNA-2 …
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