英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
看过很多细胞转染的高手，在做真核细胞转染时，都是在把核酸和转染试剂的混合液加入细胞表面以前，将融合的细胞的含血清的培养液弃去，用无血清培养基清晰后再加入混合物，4-6h后再换含血清的培养基。这是为什么呢？为什么这些转染试剂要求不含血清呢？ 传统的转染试剂有一定的细胞毒性，在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如，阳离子脂质体。带正电的脂 …
阅读更多 »细胞转染为什么不能加血清？
动物实验系列篇章之二——实验动物的编号和分组
一、编号 实验动物常需要标记以示区别。编号的方法很多，根据动物的种类数量和观察时间长短等因素来选择合适的标记方法。 (一)挂牌法：将号码烙压在圆形或方形金属牌上(最好用铝或不锈钢的,它可长期使用不生锈),或将号码按实验分组编号烙在栓动物颈部的皮带上，将此颈圈固定在动物颈部。该法适用于狗等大型动物。 (二)打号法：用刺数钳(又称耳号钳)将号码打在动物耳朵上。打 …
阅读更多 »病毒转染原理及步骤
病毒转染原理及步骤 在细胞相关的实验操作中，对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞，通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率，以达到目的基因的高效瞬时表达。 病毒转染包括以下步骤：1构建载体 2包装提纯病毒 3感染靶细胞。以慢病毒为例。 慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起 …
阅读更多 »EXP BIOL MED 2015 : 冠状动脉微栓塞！ PDCD4/NF-κB有关?
广西医科大学附属第一医院心内科的老师在临床实践中发现，冠状动脉微栓塞（CME）是急性心肌梗死的常见并发症，发生率约10%～20%，是影响微心肌微循环灌注的主要原因。 NF-κB激活是CME引起的心肌炎的重要因素。在早期的研究中，广西医科大学附属第一医院心内科的老师就发现，Pdcd4介导的信号通路在CME引起的炎症可能发挥一个重要的角色。 在研究中，老师们使用 …
阅读更多 »siRNA，shRNA，dsRNA，miRNA间的区别
RNA干扰（RNAi），即用20多个核苷 酸组成的短的双链RNA（siRNA）代替传统反义核酸进行转录后基因沉默，已经迅速而广泛地应用到基因功能，基因表达调控机制研究等热门领域，并为基因 治疗开辟了新的途径。近两年来，这方面的科学论文及报道爆炸性增长，几乎每天都有新的结果涌现。这些论文中，出现了很多与RNA干扰相关的概念，意思很相 近但并不完全相同，这里列举 …
阅读更多 »G418筛选转染克隆的注意事项
G418作为稳定转染通用的一种筛选方式，在进行筛选前应该要注意几点： 1. G418的浓度：G418是一种氨基糖苷类似物，它通过干扰核糖体功能来阻止哺乳动物细胞蛋白质的合成。因此在筛选过程中G418的浓度将对转染细胞的筛选产生很大的影响。在筛选之前最好进行条件优化确定最佳筛选浓度。尽管文献有报道筛选浓度，最好还是要自己亲自做一下筛选浓度的确定。 2. …
阅读更多 »动物实验系列篇章之六——实验动物各种体液、骨髓的采集方法
一、消化液的采集 (一) 唾液 1. 直接抽取法 在急性实验中， 可用吸管直接插入动物口腔或唾液腺导管抽吸唾液，此法非常简单，但从口腔抽吸唾液会有杂质混入。 2. 制造腮腺瘘法 在慢性实验中,收集狗的唾液，要用外科手术方法将腮腺导管开口移向体外，即以腮腺导管为中心，切成一直径约2～3cm的圆形粘膜片，将此粘膜片，与周围组织分开，穿过皮肤切口引到颊外,将带有导 …
阅读更多 »动物体内转染常见问题与解决方案
EntransterTM-in vivo体内转染试剂通过纳米技术合成，通过物理作用与核酸结合，浓缩包裹核酸，从而保护核酸免受免疫系统破坏，同时增强核酸进入细胞核中表达。不含任何动物来源成分，由于处于纳米尺度，粒径小，不易引起免疫反应，不影响动物和器官组织的功能，可以多次在同一动物注射。 一般情况下，核酸(μg)和EntransterTM-in vivo (μ …
阅读更多 »siRNA转染后什么时候做qRT-PCR检测最好？
1.siRNA转染后什么时候做qRT-PCR检测最好？ siRNA的沉默效果是有时效性的，在最佳的时间点观察，会得到更加明显的沉默效果，这个时间点的确定不能以同一株细胞转染DNA的经验确定，因为一个是消耗mRNA，一个是产生mRNA。对转染siRNA，在核酸水平，转染后8-48小时，即可观察到mRNA水平的逐步下降，一般来说，转染后48小时进行qRT-PCR …
阅读更多 »体内转染文章背后的故事
节省时间 河北医科大学附属二院的老师在临床实践中发现在多发性硬化症患者样本中有一个miRNA上调的现象。针对该miRNA的mimics很容易得到，怎么导入动物呢？他们想到了用英格恩动物体内转染试剂，将mimics与体内转染试剂混合后，尾静脉注射小鼠，几天后就可以观察结果，进行PCR，病理等研究，结果发现该miRNA的上调影响到一些免疫细胞的改变，从而导致多发 …
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