2025年 12 月 14日, 星期日
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请问一下,转染带荧光标记的NC,转染后需要拍照看转染效率,在转染后4-6小时换液吗?

一般原则: 1.转染试剂对细胞有毒性。因此通常会建议在 4–6小时后更换新鲜培养基,以减轻毒性,保证细胞状态。 2.换液是否影响转染效率? 针对你要拍荧光观察转染效率的情况: 如果只是想观察转染效率,一般建议 不要太早换液,至少等到荧光信号开始显现(通常24–48小时)再拍照。 如果细胞状态不好(明显发黄、漂浮、死亡增加),建议在 4–6小时换液,以保证细胞 …

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lonza电转,同时电转DNA和RNA,其中RNA的转染效率降低很多,单独RNA,效率很高;共转的时候,RNA的总量是一样的,一个GFP的mRNA,所以可以通过荧光判断表达量,但是当加入DNA后,GFP的荧光就非常差了,用的程序是适用于mRNA的一个程序,有什么建议吗

单独电转mRNA(GFP)信号很好,但一旦同时把DNA一起电转,GFP荧光显著下降。这个往往不是“挤占表达资源”这么简单,更多是由“电转参数 + 细胞先天免疫反应 + 总核酸/盐负载”三方面共同导致。给你一个可操作、优先级排序的排障与优化清单(不需要额外设备就能尝试): 先做两件最快见效的事 把DNA量往下砍 10–100×(起始试 10 ng~100 ng …

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