细胞的支原体检测——培养法

此种方法最为可靠且成本低廉， 但培养周期较长。常用于细胞及临床治疗细胞的支原体检查。

（一）材料与设备

1. 精氨酸肉汤培养基   按说明称量粉剂，蒸馆水配制， 高压除菌（加20％胎牛血清）。
2. 支原体琼脂培养基   按说明称量粉剂，蒸馆水配制，高压除菌（加20％胎牛血清）。
3. 其他   超净工作台、无菌吸管、试管架、培养试管／皿、37°C 培养箱。

（二）操作步骤

1. 样品的储存。样品取材后，最好尽快进行检测。样品如在24h 以内进行支原体检测， 可储存在2~8℃; 如果超过24h 样品应放置于－20℃ 以下保存。-20℃保存的样品，进行检测时需重新加入到对照培养细胞中，培养72h 后，取上清直接进行接种检测。
2. 准备精氨酸肉汤培养基、支原体琼脂培养基（半流体）。
3. 将样品分别接种到10ml 精氨酸肉汤培养基、半流体培养基中（已冷却至36℃） ，每支培养基接种样品0.5~ 1.0ml. 每种样品接种6 支精氨酸肉汤培养基，3 支半流体培养基。
4. 接种6d 后，取3 支精氨酸肉汤培养基中样品0.5 ~ 1.0ml. 复种于精氨酸肉汤培养基中。
5. 36 ℃ 培养29d, 每隔3d 观察一次。记录实验结果。

（三）结果判断

培养结束时，精氨酸肉汤培养基如有支原体生长，则液体颜色改变（粉色或黄色) 。
半流体培养基中如有支原体生长，则出现絮状沉淀