1.如为贴壁生长细胞,一般要求在转染前一日,必须应用胰酶处理成单细胞悬液,重新接种于培养皿或瓶,转染当日的细胞密度以70-90%(贴壁细胞)或2×106-4×106细胞/ml(悬浮细胞)为宜,最好在转染前4h换一次新鲜培养液。 2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质,无RNA和其他化学物质的污染,OD260/280比值应在1.8以上。 3.培养基中的血清 在开 …
阅读更多 »ECL发光液使用过程中注意事项
1. 发光液不宜暴露于强光下时间过久,请避光保存,在暗室操作。 2. 为了得到最佳的曝光效果,优化一抗、二抗的稀释比例。 3. 请选择高质量保鲜膜。 4. 对于Enlight发光液,应避免使用NaN3 回收HRP 偶联的抗体,因为NaN3 能抑制HRP 的活性。
阅读更多 »这年头谁还不会做个ELISA
这年头,学生物的不会做个ELISA,都不好意思出门。做ELISA 容易,把ELISA 做好至少要掌握以下几点: 如何选择合适的阳性对照? 阳性对照的基本组成应该尽量与检测样本的组成一致,一般阳性对照多以含蛋白保护剂的缓冲液为基质,加入一定量的待检物质。比如,以人血清为标本的测定,阳性对照多用确定的病人血清或者以复钙人血浆为原料加入一定量标准品。 如何选择合适 …
阅读更多 »悬浮细胞难转染怎么办?
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作 …
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英格恩生物技术博客 生物实验干货分享