EntransterTM-R4000是英格恩生物(Engreen Biosystem)最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂。EntransterTM-R4000不仅可以转染小RNA,而且针对mRNA等长链RNA优化。 EntransterTM系列转染试剂的成分和原理 Entr …
阅读更多 »质粒DNA转染实验效率影响因素
1, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几率会高一些。有的转染试剂还会提供一些 …
阅读更多 »如何提高悬浮细胞的转染效率?
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周 …
阅读更多 »怎样纯化信号通路关键性酶?
随着老龄化的不断加剧,癌症逐渐成为威胁人类生命和健康的最可怕的敌人。为检测药物对肿瘤信号通路关键酶的作用,实验中经常通过基因重组技术,获得大量的外源性蛋白,并通过体外酶活检测来筛选化合物,为细胞水平和体内检测提供很好的基础。下面就如何纯化肿瘤信号通路关键性酶进行简单的介绍。 1、获得重组质粒 1)通过查阅文献或者资料,找到目标蛋白存在的细胞类型以及序列的CD …
阅读更多 »为什么Entranster试剂可以进行有血清转染?
使用脂质体等转染试剂时,由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞,引发细胞毒性,导致转染效率降低,故不能有血清转染。EntransterTM只浓缩包裹核酸不会将血清带入细胞,所以可以有血清转染,同时由于血清的存在,有利于细胞的状态维护,故能提高转染效率。
阅读更多 »病毒感染细胞实验效率低怎么办?
病毒感染细胞本来效率就较低,一定要注意以下几点:1.感染时的培养基尽量少些;2. 每1ml的培养基中加入5-10ul的Polybrene(储存液浓度为2mg/ml ),可以提高效率约3-5倍。不过病毒感染效率的问题都是相对的,达到自己的研究目的即可。 病毒感染细胞本来效率就较低,整个过程相对复杂难操作,一般一次花费周期至少两三个月 …
阅读更多 »细胞转染实验注意事项
1.如为贴壁生长细胞,一般要求在转染前一日,必须应用胰酶处理成单细胞悬液,重新接种于培养皿或瓶,转染当日的细胞密度以70-90%(贴壁细胞)或2×106-4×106细胞/ml(悬浮细胞)为宜,最好在转染前4h换一次新鲜培养液。 2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质,无RNA和其他化学物质的污染,OD260/280比值应在1.8以上。 3.培养基中的血清 在开 …
阅读更多 »悬浮细胞不易转染怎么办?
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞 …
阅读更多 »质粒DNA转染实验效率影响因素
1, 质粒的构建:启动子的选择 启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响,但是对转染结果却有着微妙的影响。 2, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的 …
阅读更多 »RNA转染实验效率低的原因
RNA转染效率低,可能的原因: 1. 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂,如Entranster。 2. 转染试剂和RNA的量不够,或者比例不对。优化实验条件,调整试剂和RNA用量,优化二者比例。 3.检测时间有问题。适当调整检测时间。 4. RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 5. 细胞状态不佳。调整细胞状态,调整细胞融合度。
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