英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
世界上最遥远的距离不是天涯海角，而是我天天和你在一起，你却不了解我。 荧光定量PCR常做，相关概念常说，可它们到底啥意思？ 荧光定量PCR中基线、阈值、Ct值、扩增曲线、熔解曲线等基本概念 基线（Baseline）：是指在PCR扩增反应的最初数个循环里，荧光信号变化不大。接近一条直线，这样的直线即是基线。 荧光域值（threshold）的设定：一般将 PCR …
阅读更多 »世界上最遥远的距离之荧光定量PCR
如何做好细胞电转染实验？
要想做好细胞的电转染实验，应注意以下几点： 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择 …
阅读更多 »细胞转染效率低的原因
细胞转染效率低的原因可从以下几方面找： 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策：用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策：对大多数细胞而言，质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3，一般要做优化实验，比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策：用好的质粒纯化试剂确保质粒 …
阅读更多 »体内转染（entranster）与细胞自噬和大鼠缺血性损伤研究
卒中尤其是缺血性卒中，可能导致严重的神经功能障碍，甚至死亡，在世界范围内有较高的发病率和死亡率。脑缺血后神经元凋亡、自噬、坏死等形态学变化产生细胞死亡的复杂特征。细胞自噬参与了II型程序性细胞死亡，并且在脑缺血中，自噬作用在累积。自噬作用是复杂的，取决于大脑的成熟度，区域的缺血严重程度等。现分享一篇运用体内 …
阅读更多 »几点提高细胞转染效率的建议
1．选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的纳米材料的Entranster试剂。 2．保持最佳的 …
阅读更多 »哪些因素会造成western-blot发光时发生荧光淬灭？
荧光淬灭是Western Blot发光时常见的现象，即加ECL发光液后立刻可以看到很明显的亮光，但亮光很快就消逝了，压完片后条带却很弱，甚至没有条带，发生这种情况的原因可能有以下几个方面: 1. 抗体浓度太高，局部过多的HRP会快速消耗底物，导致荧光信号过强，条带呈灼烧样。可降低抗体上样量。 2. 抗体浓度太低，荧光信号太弱，可能第一次压片能够获得很弱的条带 …
阅读更多 »电转染实验需要注意的事项
1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞的选择 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺 …
阅读更多 »miR-126-5p通过抑制滋养层细胞依赖Caspase-1的焦亡来保护不明原因复发性自然流产
文章标题 《miR-126-5p通过抑制滋养层细胞依赖Caspase-1的焦亡来保护URSA》 英文标题：*miR-126-5p protects from URSA via inhibiting Caspase-1-dependent pyroptosis of trophoblast cells* 期刊与影响因子 期刊名称：Cellular and Mo …
阅读更多 »western-blot实验注意事项
·滤纸、胶、膜之间的大小，一般是滤纸>=膜>=胶。 ·滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡，气泡会造成短路。 ·因为DEPF膜的疏水性，膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中，膜也必须随时保持湿润（干膜法除外）。 ·滤纸可以重复利用，上层滤纸（靠膜）内吸附有很多转移透过的蛋白质，所以上下滤纸一定不能弄混，在不能分辨的情况下，可以将靠胶滤纸换新的 …
阅读更多 »如何有效提高细胞转染效率？
1．选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如Entr …
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