英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1， 质粒的构建：启动子的选择 启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响，但是对转染结果却有着微妙的影响。 2， 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与IL-17下调小鼠胶原性关节炎嗅间充质干细胞的免疫抑制能力研究
嗅间充质干细胞（OE-MSCs）是嗅觉固有层中一种新的常驻干细胞类型。OE-MSCs通过调节T细胞的反应，包括调节性T细胞（Treg）的上调和Th1/Th17细胞的下调而发挥其免疫抑制能力。作为炎性细胞因子，IL-17在胶原诱导性关节炎（CIA）的发展过程中起着关键的作用。然而，目前尚不清楚IL-17水平的升高是否会影响OE-MSCs在炎症状态下的免疫抑制功 …
阅读更多 »什么是腺病毒载体？
腺病毒属于腺病毒科，分为两个属：禽腺病毒属（鸟腺病毒）和哺乳动物腺病毒属（人、猴、牛、马、猪、羊、犬和负鼠腺病毒）。这些病毒均携带一个线性双链DNA 基因组，由直径为70~100mm 的二十面体衣壳蛋白包裹。约36kb 的基因组包括4 个提供调控和复制功能的早期转录单位(El 、E2 、E3 、E4) 、2 个延迟早期单位(IX 和IVa2)和1 个指导包括 …
阅读更多 »为什么Entranster试剂可以进行有血清转染？
使用脂质体等转染试剂时，由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞，引发细胞毒性，导致转染效率降低，故不能有血清转染。EntransterTM只浓缩包裹核酸不会将血清带入细胞，所以可以有血清转染，同时由于血清的存在，有利于细胞的状态维护，故能提高转染效率。
阅读更多 »动物体内转染试剂的作用原理是什么？
体内转染试剂Entranster-in vivo通过纳米技术合成，通过物理作用与核酸结合，浓缩包裹核酸，从而保护核酸免受免疫系统破坏，同时增强核酸进入细胞核中表达。不含任何动物来源成分，由于处于纳米尺度，粒径小，不易引起免疫反应，不影响动物和器官组织的功能，可以多次在同一动物注射。
阅读更多 »电转染实验时，对于方波形式的脉冲条件是什么？
一般来说，方波脉冲的理论起始条件可通过指数衰减参数来确定，即在保持电容不变的情况下，将脉冲长度减半，电压增加约10%。之后的优化可在理论计算的脉冲电压附近以10 V为梯度增减。如果不知道指数衰减脉冲条件，可通过测试电压、电容和脉冲长度范围找到最佳的方波脉冲条件。当使用0.4cm电转杯时 …
阅读更多 »如何做好细胞DNA转染实验？
我认为，要想做好质粒DNA细胞转染实验，应注意以下几点： 1， 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟，相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大，又没有经验，选择特别注明可以转大质粒的转 …
阅读更多 »western-blot实验影响因素
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的 …
阅读更多 »哪些因素会造成western-blot发光时发生荧光淬灭？
荧光淬灭是Western Blot发光时常见的现象，即加ECL发光液后立刻可以看到很明显的亮光，但亮光很快就消逝了，压完片后条带却很弱，甚至没有条带，发生这种情况的原因可能有以下几个方面: 1. 抗体浓度太高，局部过多的HRP会快速消耗底物，导致荧光信号过强，条带呈灼烧样。可降低抗体上样量。 2. 抗体浓度太低，荧光信号太弱，可能第一次压片能够获得很弱的条带 …
阅读更多 »电转染实验需要注意的事项
1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞的选择 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代 …
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