2026年 6 月 18日, 星期四
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电转染实验注意事项

选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 细胞的选择 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2d)。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛,表面结构致密比稳定 …

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血清对于细胞转染效率有什么影响?

        血清中含有大量的蛋白质,在转染过程中,带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附,影响转染效率。另外,使用脂质体等转染试剂时,由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞,引发细胞毒性,导致转染效率降低,故不能有血清转染。这些转染试剂要求在转染前换无血清培养基,转染后4-6h在更换成有 …

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细胞转染实验效率低下的陷阱

      细胞转染是细胞生物学和分子生物学的一种常用的技术手段。而转染效率低下却是实验人员经常遇到的问题,尤其是原代细胞转染,转染难度更大。现分享几个细胞转染实验常见的几个陷阱,望实验人员能够注意。 1.准备不足 做细胞转染的时候,在开展正式实验前要多做预试验,优化转染条件。优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密 …

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电转染实验时,DNA有什么要求?

      使用高纯度、无菌和无污染的DNA进行电穿孔实验。质粒DNA要求无内毒素,OD值为1.8-2.0。不建议使用微型核酸制备试剂盒准备DNA,因为它可能含有高水平的内毒素。 不要使用仅用乙醇沉淀法纯化的DNA。乙醇沉淀法中残留的盐会引起电流改变并对电穿孔产生负面影响。 建议DNA的浓度范围为1-5 mg/ml。使用浓度较高的DNA可能会导致与细胞不均匀 …

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Real-time qPCR实验设计—-从开始到结束

实验设计其实比实验本身更重要!!好的实验设计可以事半功倍,节省时间节省时间!!尤其做生物实验,一定要查询尽可能完全的相关资料,整理好思路,设计好实验路线。当然实验过程中出现各种各样的变化,但有足够多的背景知识,就可以分析原因,才有可能创新。 一、 对于一个real-time qPCR而言,首先就是实验材料的处理和料;然后引物设计,这步至关重要,好的引物是实验 …

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免疫组化技术大全

一、免疫组织化学简介 免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体 …

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siRNA转染与DNA转染有什么不一样?

小干涉RNA(siRNA)是在RNA干涉过程中人工体外合成的小片段RNA,由约20个碱基对组成,包括5个磷酸盐,2个核苷和3个悬臂。SiRNA在RNA沉默通道中起中心作用,是对特定信使RNA(mRNA)进行降解的指导要素。在实验室中通过RNAi这种方式,利用具有同源性的双链RNA(dsRNA)诱导序列特异的目标基因的沉默,迅速阻断基因活性。 什么样的转染试剂 …

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