1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮肤,头发,所有徒手接触过 …
阅读更多 »细胞RNA转染注意事项
细胞RNA转染实验,需要注意以下几点: 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA …
阅读更多 »western-blot实验影响因素有哪些?
影响western-blot实验的因素有哪些? 1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量,蛋白变性是否充分等等,还有,蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外,蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的要求较高,分离胶的PH值应在8.8左右,而浓缩胶的PH应 …
阅读更多 »如何提高病毒感染实验效率?
可使用病毒感染增强剂envirus提高病毒的感染效率,下面以慢病毒为例,说一下实验过程。 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中,以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)。 2.感染 ⑴将2ul的EnvirusTM-LV用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成EnvirusTM-LV稀释液。4℃静置5 …
阅读更多 »悬浮细胞为什么不容易转染?
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周 …
阅读更多 »CCK8实验时,必须预培养细胞吗?
不一定。如果要向保持细胞的最好状态,建议预培养细胞。如果不做细胞预培养,细胞内的脱氢酶可能会不稳定。也有人不做细胞预培养,但在做标准曲线和检测时需要统一检测条件。 如需了解更多关于cck8产品的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/cck-8-kit
阅读更多 »从面部识别到行走姿势:解密支付系统的生物识别技术
据科技媒体TechCrunch.com报道,面临着越来越复杂的网络袭击以及各式各样的信用卡诈骗,支付系统产业正尝试将各种生物识别技术加入它们的系统,以加强安全,防止入侵。 根据最近报道,万事达卡正在推出以智能手机“自拍照”验证的面部识别支付服务。目前这个项目正在测试当中。虽然现在用户们仍需同时使用密码,但是不久的将来,仅“自拍照”将足以完成支付。万事达卡表示 …
阅读更多 »PCR实验扩增产物出现杂带是什么原因?
可能的原因和对应的解决方案如下: 1.引物用量偏大,引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。 2.循环的次数过多。适当增加模板的量,减少循环次数。 3.酶的用量偏高或酶的质量不好,应降低酶量或调换另一来源的酶。 4.退火温度偏低,退火及延伸时间偏长。应提高退火温度,减少变性与延伸时间,也可采用二种温度的 pcr 扩增。以 2 ℃为梯度设计梯度 PCR …
阅读更多 »RNA提取试剂
RNA提取试剂 1.效果与invitrogen一样。 图片说明:右为invitrogen公司TRIzol提取结果,左为英格恩公司Trizen提取结果,样品为小鼠肝脏。 Invitrogen Trizol result Engr …
阅读更多 »电转染实验效率低的原因有哪些?
电转染实验效率低,可能是以下几点原因: 1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞选择错 …
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