英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1、免疫组化实验所用的组织和细胞标本有哪些？ 实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理大片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可 …
阅读更多 »免疫组化的经验总结－常见问题
RNA转染实验效率低是什么原因？
RNA转染效率低，可能的原因： 1. 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂，如Entranster。 2. 转染试剂和RNA的量不够，或者比例不对。优化实验条件，调整试剂和RNA用量，优化二者比例。 3.检测时间有问题。适当调整检测时间。 4. RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 5. 细胞状态不佳。调整细胞状态，调整细胞融合度。
阅读更多 »western-blot实验注意事项
• 滤纸、胶、膜之间的大小，一般是滤纸>=膜>=胶。 • 滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡，气泡会造成短路。 • 因为DEPF膜的疏水性，膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中，膜也必须随时保持湿润（干膜法除外）。 • 滤纸可以重复利用，上层滤纸（靠膜）内吸附有很多转移透过的蛋白质，所以上下滤纸一定不能弄混，在不能分辨的情况下，可以将靠胶滤 …
阅读更多 »细胞转染效率低的原因
转染效率低的原因可从以下几方面找： 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策：用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策：对大多数细胞而言，质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3，一般要做优化实验，比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策：用好的质粒纯化试剂确保质粒DN …
阅读更多 »细胞转染效率影响因素有哪些？
细胞转染效率受多种因素影响，主要因素有下面几个： 1．转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒的转染试剂，如Entranster …
阅读更多 »细胞转染效率低的原因
细胞转染效率低的原因可从以下几方面找： 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策：用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策：对大多数细胞而言，质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3，一般要做优化实验，比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策：用好的质粒纯化试剂确保质粒 …
阅读更多 »CCK8（engreen）与CD147增加慢性阻塞性肺病患者吸烟引起的粘液分泌研究
CD147在许多组织中表达，并参与许多炎症性疾病。新的证据表明，粘液分泌过多是慢性阻塞性肺病（COPD）的一个恶性因素，导致严重的气道阻塞和反复的气道感染。然而，CD147是否参与慢性阻塞性肺病的粘液生成尚不清楚。现分享一篇CCK8（engreen）与CD147增加慢性阻塞性肺病患者吸烟引起的粘液分泌研究的文献，以供参考。
阅读更多 »siRNA转染时细胞铺板密度为什么很重要？
RNA转染试剂Entranster-R4000成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很重要，一般细胞数量较少时转染效率高，一些试剂由于本身毒性的影响，太低的细胞数量时毒性明显，所以会要求较高的细胞密度（汇合度），顺便说一句，看一个转染试剂的 …
阅读更多 »对次生细胞壁合成进行转录调控的技术路线
木材即是木本植物的次生木质部，包含木本植物光合作用产生的绝大部分生物量，是制浆造纸工业、建筑业、纺织业以及新兴的生物能源产业的重要原材料。 木材的形成主要依赖于次生木质部的年度周期性生长和累加。木材主要由纤维素、木质素和半纤维素三种成分组成，也就是我们通常所说的纤维生物质。在植物所积累的太阳能中，90%以上是以纤维生物质形式存在。因此，木材在生产应用过程中， …
阅读更多 »怎样提高病毒感染实验效率？
可使用病毒感染增强剂envirus提高病毒的感染效率，下面以慢病毒为例，说一下实验过程。 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。 2.感染 ⑴将2ul的Envirus-LV用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成Envirus-LV稀释液。4℃静置5分钟。 …
阅读更多 »