英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
CD147在许多组织中表达，并参与许多炎症性疾病。新的证据表明，粘液分泌过多是慢性阻塞性肺病（COPD）的一个恶性因素，导致严重的气道阻塞和反复的气道感染。然而，CD147是否参与慢性阻塞性肺病的粘液生成尚不清楚。现分享一篇CCK8（engreen）与CD147增加慢性阻塞性肺病患者吸烟引起的粘液分泌研究的文献，以供参考。
阅读更多 »细胞转染效率影响因素
1.组织培养试剂 优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如，RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸，葡萄糖)，维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物 …
阅读更多 »如何有效提高细胞转染效率？
1．选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如Entr …
阅读更多 »免疫球蛋白G ( IgG) 片段的水解（一）
基本方案1 木瓜蛋白酶水解IgG 成Fab 片段摸索性试验 此法适用于小鼠（任何亚类）、大鼠、人、山羊、绵羊、马、鸡、豚鼠和牛的 IgG 水解。 材料 保存于 PBS 中的 2mg/ml 纯化的lgG 木瓜蛋白酶 水解缓冲液：0. 02mol/L EDTA （ 二钠盐） / 0. 02mol/L 半胱氨酸／PBS （新鲜配制，冰上保存<10h) 溶 …
阅读更多 »western-blot实验心得体会
我做了很久的WB，最大的一个难点感觉在于样品制备上！蛋白的降解有些时候是你想象不到的，可能出奇的糟糕，也可能完全没事~~如果单独做WB的话，感觉以“快速彻底裂解，先变性后保存”的原则比较有效，尽量选择足够强的裂解液，甚至直接给loading buffer裂解，然后取出部分蛋白定量，其余 …
阅读更多 »适合科研人看的书籍有哪些？
总听师姐说，养细胞要有耐心，要足够细心，于是我用尽了所有的耐心去照顾它们，结果他们老是被污染，不仅长得不好，有的更是长着长着就变了模样……我还是从前那个少年，可细胞，你怎么变成了这样？ 我开始自我反省，观察污染类型，找原因。问了各路大神，每个人的答案都不一样；搜百度，上知乎，倒是收获了一堆资料，可是都没有详细的操作步骤；一筹莫展之际，师姐再次出现了，叮嘱道： …
阅读更多 »质粒DNA转染实验的要点
1， 质粒的构建：启动子的选择 启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响，但是对转染结果却有着微妙的影响。 2， 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟，相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率 …
阅读更多 »提高细胞转染实验效率的要点
1.组织培养试剂 优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如，RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸，葡萄糖)，维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物 …
阅读更多 »Hela细胞转染后出现死亡的原因是什么？
可能有多种原因： 目标蛋白对细胞有毒性，导致细胞死亡； 转染试剂以及DNA用量信息需要优化，否则对细胞具有伤害； 细胞贴壁转染之后没有正常换液。 建议： 考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统； 摸索转染试剂以及DNA用量信息，如果转染试剂毒性太大，可以考虑尝试Entranster等毒性较小的转染试剂。 对转染后的细胞进行换液处理，如果细胞状态感觉不够 …
阅读更多 »熬夜改变基因 或诱发慢性病
回放： 最近，《临床内分泌学和新陈代谢期刊》发表了瑞典乌普萨拉大学和卡罗林斯卡医学院科学家的研究成果。他们招募了15名健康的男性志愿者进行睡眠实验，发现一夜不眠后，志愿者生物钟核心基因的表达发生了改变。 疑问： 仅仅通宵一晚就会改变基因表达？睡眠和哪些生命活动有交叉？睡眠时间的长短又与哪些疾病有着密切联系？ 解答： 睡眠受两方面因素影响，即生物的昼夜节律和睡 …
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