英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
花1000 美元就能为个人基因组测序，这是10多年来许多基因组测序公司奋斗的目标。现在，美国 Illumina 公司宣布，他们已能够使这一愿望成为现实。 位于圣迭戈的 Illumina 公司本周发布消息说，将推出一款叫做 HiSeq X Ten 的测序仪，每台售价100万美元，但一次至少要订购1 台。该公司表示，这一仪器能以不到1000美元的价格每天为 5 …
阅读更多 »个人基因组测序将进入千美元费用时代
western-blot实验结果影响因素
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的 …
阅读更多 »免疫球蛋白G (IgG) 的纯化（二）
基本方案2 蛋白A交联琼脂糖凝胶亲和层析 蛋白A 通常用于人（除lgG3外；小鼠lgG1 结合力也较弱）、兔、豚鼠和猪抗体的纯化。 材料 腹水或MAb 上清 PBS, pH8.0 和pH 7.3 1mol/L NaOH 蛋白A 交联琼脂糖凝胶CL-4B 0.1mol/L 柠檬酸， pH 按照所分离的抗体亚类的需要而定（步骤3) 10% (m/V) NaN3 …
阅读更多 »western-blot实验注意事项
·滤纸、胶、膜之间的大小，一般是滤纸>=膜>=胶。 ·滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡，气泡会造成短路。 ·因为DEPF膜的疏水性，膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中，膜也必须随时保持湿润（干膜法除外）。 ·滤纸可以重复利用，上层滤纸（靠膜）内吸附有很多转移透过的蛋白质，所以上下滤纸一定不能弄混，在不能分辨的情况下，可以将靠胶滤纸换新的 …
阅读更多 »细胞转染实验方法有哪些？
1. 脂质体法。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体则不同，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。脂质体法始于1987年，此法的出现使得转染效率、转染的稳定性和可重复性大大提高。阳离子脂质 …
阅读更多 »CCK8（engreen）与Brevilin对结肠腺癌细胞CT26增殖抑制作用和分子机制研究
结肠腺癌是最常见的肿瘤之一。人结肠癌的发病率和死亡率分别排名为第三和第四。手术、放疗和化疗是目前的主要治疗方法，但其毒性大，副作用大，复发率高。Brevilin是一种从鹅不食草分离出的倍半萜内酯，具有抑制各种肿瘤细胞增殖效应。现分享一篇CCK8（engreen）与Brevilin对结肠腺癌细胞CT26增殖抑制作用和分子机制研究的文献，以供参考。
阅读更多 »RNA转染效率不佳的原因是什么?
1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这 …
阅读更多 »RNA转染效率低的原因
RNA转染效率低，可能的原因： 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂，如Entranster-R4000，纳米材料，毒性低，效率高。 转染试剂和RNA的量不够，或者比例不对。优化实验条件，调整试剂和RNA用量，优化二者比例。 检测时间有问题。适当调整检测时间。 RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 细胞状态不佳。调整细胞状态，调整细胞融合度。 &nbs …
阅读更多 »悬浮细胞的siRNA转染步骤
悬浮细胞的siRNA转染操作步骤，以24孔板siRNA转染为例 1.提前1天细胞种植 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么就用2×105的细胞进行转染。 2.转染过程 ⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入一定量无血清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为2 …
阅读更多 »我总结的western-blot实验经验
我做了很久的WB，最大的一个难点感觉在于样品制备上！蛋白的降解有些时候是你想象不到的，可能出奇的糟糕，也可能完全没事~~如果单独做WB的话，感觉以“快速彻底裂解，先变性后保存”的原则比较有效，尽量选择足够强的裂解液，甚至直接给loading buffer裂解，然后取出部分蛋白定量，其余加入loading buffer100度充分变性，再分装保存。有些时候比蛋 …
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