英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
进行体外哺乳动物的细胞培养，其要点之一是在培养器皿中营造一种生理环境和特殊细胞类型的特异性反应。液态培养基至少要为细胞提供生长所需的营养物质、能量、恒定的pH 和适当的渗透压。此外，培养的外环境，尤其隔水式CO2培养箱，一定要达到稳定的温度和湿度，以防培养液蒸发，还要供给呼吸所需的O2 和维持培养液中碳酸氢盐缓冲系统的CO2 。目前普遍使用的培养基一般由两部 …
阅读更多 »细胞的支原体检测——培养法
此种方法最为可靠且成本低廉， 但培养周期较长。常用于细胞及临床治疗细胞的支原体检查。 （一）材料与设备 1. 精氨酸肉汤培养基 按说明称量粉剂，蒸馆水配制， 高压除菌（加20％胎牛血清）。2. 支原体琼脂培养基 按说明称量粉剂，蒸馆水配制，高压除菌（加20％胎牛血清）。3. 其他 超净工作台、无菌吸管、试管架、培养试管／皿、37°C 培养箱。 （ …
阅读更多 »RNA细胞转染实验注意事项
进行RNA细胞转染实验时，应注意以下几点： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中R …
阅读更多 »怎样做好细胞电转染实验？
要想做好细胞的电转染实验，应注意以下几点： 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择合适的细胞 用于电转的细胞 …
阅读更多 »都说RNAi很容易降解，转染效率很低，是真的吗？
RNAi就是利用降解双链RNA的酶系统，人工引入一段和目标RNA互补的序列，这样，在细胞内形成双链RNA，诱发降解机制，使目标RNA降解，无法被进一步翻译。 在转染过程中，有人就在担心，dsRNA的稳定性是相对于单链RNA而言的！RNA怎么办？ RNAi中，标准的非修饰的siRNA确实容易降解，这不仅在保存过程中，而且在转染过程中。对siRNA的降解，可以合 …
阅读更多 »细胞RNA转染实验的一些建议
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …
阅读更多 »细胞生长速度非常快，现在在密度20-30%时就开始转染，但是到了60小时后细胞密度已经非常高，几乎没有空隙。如果继续等待，是否会导致细胞状态不佳，从而影响到实验中蛋白的表达效果。
细胞密度确实会影响转染效率和蛋白表达。如果细胞密度过高，可能会导致以下问题： 营养和废物积累：高密度会导致培养基中的营养迅速消耗，废物积累增加，这会影响细胞的健康状态，进而影响蛋白表达。 转染效率降低：高密度时，转染试剂和DNA更难均匀分布，影响转染效率。 蛋白表达影响：过度拥挤的细胞状态可能导致蛋白表达效率下降，甚至可能出现表达异常。 建议： 调整转染密度 …
阅读更多 »细胞转染效率影响因素
细胞转染效率受多种因素影响，主要因素有下面几个： 1．转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒的转染试剂，如Entranster …
阅读更多 »如何解决病毒感染细胞效率低的难题？
病毒感染细胞本来效率就较低，一定要注意以下几点：1.感染时的培养基尽量少些；2. 使用病毒感染增强剂Envirus-LV来提高感染效率。 病毒感染细胞本来效率就较低，整个过程相对复杂难操作，一般一次花费周期至少两三个月，多则几个月到十几个月不等，经费也是几万到十几万。万一实验失败需要重复操作会花费更多的时间和开支。所以有效提高病毒转染效 …
阅读更多 »细胞转染siRNA后，目标基因的表达反而升高的原因是什么？
siRNA转染后目标基因不降反升的现象可能由多种原因引起，常见的因素包括： siRNA设计不合理： siRNA的靶点选择不佳，未能有效靶向目标基因的mRNA，导致抑制效果差或反而激活了基因表达。可以尝试设计不同的siRNA靶点或使用更为优化的siRNA工具进行设计。 转染效率问题： 低转染效率可能导致siRNA无法进入足够多的细胞，从而未能有效抑制目标基因。 …
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