2024年 7月 18日, 星期四
新闻

细胞生物学

转染用的质粒,你提对了吗?

老板天天催着要实验进展,是不是很郁闷?可是细胞不给力,是不是很忧郁?刚刚复苏的细胞长的挺好的,可是转染后,细胞状态莫名其妙就变差了,是不是很伤心?转染试剂毒性大,换转染试剂?结果还是一样,是不是很无奈?勉强收了一点点细胞,可是还不够做个western blot的,是不是很抓狂?实验总是不能顺利进行,找不到原因,是不是都要吐血了?没人给指点迷津,是不是心都要碎 …

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RNA转染效率低的原因是什么?

RNA转染效率低,可能的原因: · 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂,如Entranster试剂。 · 转染试剂和RNA的量不够,或者比例不对。优化实验条件,调整试剂和RNA用量,优化二者比例。 · 检测时间有问题。适当调整检测时间。 · RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 · 细胞状态不佳。调整细胞状态,调整细胞融合度。

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细胞转染实验的建议

1.如为贴壁生长细胞,一般要求在转染前一日,必须应用胰酶处理成单细胞悬液,重新接种于培养皿或瓶,转染当日的细胞密度以70-90%(贴壁细胞)或2×10^6-4×10^6细胞/ml(悬浮细胞)为宜,最好在转染前4h换一次新鲜培养液。 2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质,无RNA和其他化学物质的污染,OD260/280比值应在1.8以上。 3.培养基中的血清 …

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如何做好细胞转染实验?

1.选择合适的转染试剂       不同细胞系转染效率通常不同,但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然,最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的 …

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如何做好DNA转染实验?

我认为,要想做好质粒DNA细胞转染实验,应注意以下几点: 1, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几 …

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磷酸钙-DNA共沉淀法的原理和步骤

前些时间有微友在平台上咨询细胞转染的事项,并对一篇博客文章《为什么磷酸钙转染并不稳定?为什么磷酸钙转染并不经济?》比较感兴趣。在这里,对这位微友的疑惑进行更加全方位的了解,在此将磷酸钙转染的原理和步骤和大家分享,以供交流讨论。 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时,可使 DNA 附在细胞表面,这有利于细胞吞入摄取核酸,或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进 …

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细胞铺板密度对于siRNA转染为什么很重要?

       RNA转染试剂Entranster-R4000成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率和总的细胞数量就很重要,一般细胞数量较少时转染效率高,一些试剂由于本身毒性的影响,太低的细胞数量时毒性明显,所以会要求较高的细胞密度(汇合度),顺便说一句,看一个转染试剂 …

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电转染实验的建议

关于细胞的电转染实验,现提出以下几点建议供大家参考: 1.   选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2.   选择合适的细胞 用于 …

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MTT法细胞增殖检测中需要注意的8大问题

MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活的方法。MTT,即四氮唑化合物,能与活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶发生反应而将淡黄色的MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶物甲瓒而沉积在目的细胞中。在一定的细胞数范围内,甲瓒的形成量与细胞数成线性关系。用DMSO将细胞中沉积的蓝紫色甲瓒溶解后,在多功能酶标仪上检测其相应的吸光值,计算细胞浓度。 需注意的是,MTT只能与活 …

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