2024年 4月 12日, 星期五
新闻

细胞生物学

提高RNA转染效率的几点建议

1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮肤,头发,所有徒手接触过 …

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RNA转染效率低的原因是什么?

RNA转染效率低,可能的原因: · 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂,如Entranster试剂。 · 转染试剂和RNA的量不够,或者比例不对。优化实验条件,调整试剂和RNA用量,优化二者比例。 · 检测时间有问题。适当调整检测时间。 · RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 · 细胞状态不佳。调整细胞状态,调整细胞融合度。

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细胞电转染实验注意事项

选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 细胞的选择 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2d)。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛,表面结构致密比稳定 …

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细胞的聚集体培养

聚集体培养(aggregate culture) 是指先将肿瘤细胞在旋转摇动培养仪上培养,使肿瘤细胞形成规则的细胞球体结构,然后再将球体进行静止培养,肿瘤细胞可自由从球体向周围移动,观察测量肿瘤细胞向周围移动的情况,记录移出细胞数、细胞移出最远距离等,也可计算肿瘤细胞运动的速度,比较不同肿瘤细胞运动性的差别。 (一)材料与设备 50ml 锥形瓶、旋转摇动培养 …

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细胞培养该不该加抗生素?

细胞有没有正常生长,或细胞是否污染,是细胞培养的关键。虽然,顺利的时候,细胞培养起来很简单,可不顺的时候就会出现各种问题——-细胞污染啦、细胞生长缓慢啦、细胞形态看着不对劲啦、死细胞率多啦。。。。。。。。毕竟,细胞作为一种体外培养的物质,受许多外界因素的影响,培养基、血清、孵育温度,CO2浓度。。。。。。除此之外,还有一种影响因素就是 …

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人胚胎肺成纤维细胞的培养

成纤维细胞作为体外最易培养成功的正常细胞,用途广泛。但由于其有限的传代寿命,通常用于细胞衰老的研究,在肿瘤研究中,常常作为正常细胞对照,用于研究细胞恶性转化的条件和影响因素。另外, 它也常用于药物毒性的检测。体外培养的成纤维细胞, 还用于疾病的诊断,如染色体异常疾病的筛选、先天性代谢遗传疾病的细胞化学及生物化学检验和鉴定。 (一)材料与设备 1.设备   超 …

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转化细胞在软琼脂中的生长

恶性转化的细胞在许多方面不同于其相应的正常细胞,主要不同在于它们失去了接触抑制生长,获得永生性和在动物宿主体中形成肿瘤的能力。软琼脂培养可作为体外检测细胞转化和致瘤性的替代方法。 材料 2% (w/ v) 琼脂 基础营养培养基,如DMEM ,含24. 6 %和20% (v/ v) 胎牛血清 单细胞悬液 12 孔培养板 15ml 聚碳酸酣锥形离心管 ,灭菌 对 …

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MTT法细胞增殖检测中需要注意的8大问题

MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活的方法。MTT,即四氮唑化合物,能与活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶发生反应而将淡黄色的MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶物甲瓒而沉积在目的细胞中。在一定的细胞数范围内,甲瓒的形成量与细胞数成线性关系。用DMSO将细胞中沉积的蓝紫色甲瓒溶解后,在多功能酶标仪上检测其相应的吸光值,计算细胞浓度。 需注意的是,MTT只能与活 …

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慢病毒载体的滴定

一、试剂 完全培养基、DMEM 培养基、胎牛血清(FBS)、慢病毒载体储备液、多聚甲酸( 4%) ( 可选;见步骤15)、青霉素/慢病毒滴定试剂盒链霉素溶液( P/S ) (100 ×)、磷酸盐缓冲盐水( PBS )、聚凝胺(海美溴铵) ( 8mg/mL) 、QuickTiter (慢病毒相关的HIV p24 )、293T 细胞、胰蛋白酶-EDTA ( 0. …

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怎么样做好siRNA细胞转染实验?

1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮 …

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