2022年 5月 17日, 星期二
新闻

细胞生物学

细胞siRNA转染有哪些方法?

siRNA导入细胞有以下几种方法:化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素:细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术(Entranster)是最为常用的方法,而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好。

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如何制备血清减量或无血清培养基?

目前,人们普遍认可单一类型细胞的最合乎生理的培养基是添加了蛋白质的、并且含有适当浓度的各种成分以及细胞外基质组分的限定培养基。 材料 基础营养培养基,如DMEM 营养物质:无机盐,氨基酸,维生素 微量元素 添加剂:生长因子和激素,其他各种培养基成分(见表1)  凭经验先选用特别适合某种细胞生长的培养基,减少未限定培养基成分的浓度,直至细胞增殖能力降低,但活力 …

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悬浮细胞的分瓶操作步骤

悬浮细胞的分瓶 轻轻的摇匀培养瓶中的细胞培养物,吸出1 ml 到微量离心管中。 对细胞进行计数,同时观察细胞状态。 计算出稀释倍数,决定种子液的量。 吸出适量的细胞到新的培养瓶中。 加入适量的37°C 预热的新培养基。 把细胞放入培养箱,并把盖子松开。 继续培养母液培养物,不加入新的培养基。注意每次传代后都要保留原液作为备份,以防传代后的细胞被污染。在培养瓶 …

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细胞生长缓慢的原因分析

开始培养细胞后,就恨不得写好每一天的进度计划,甚至连出成果那天的日期都预估好,然而,生活总是充满了意外…… 我的细胞,你为啥长的这么慢呢??究其原因,真是丰富多彩…… 如果整个实验室只有你一个人遇到这个问题…… 1. 检査你所培养的细胞是否存在污染。 (a)如果培养细胞未添加抗生素(必须添加!),细胞污染则是不可避免的。 (b) 检测可能污染的途径和原因(无 …

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RNA转染实验效率低的原因

RNA转染效率低,可能的原因: 1. 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂,如Entranster。 2. 转染试剂和RNA的量不够,或者比例不对。优化实验条件,调整试剂和RNA用量,优化二者比例。 3.检测时间有问题。适当调整检测时间。 4. RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 5. 细胞状态不佳。调整细胞状态,调整细胞融合度。

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细胞转染效率低的原因及解决方案

细胞转染是细胞生物学和分子生物学的一种常用的技术手段。而转染效率低下却是实验人员经常遇到的问题,尤其是原代细胞转染,转染难度更大。现分享几个细胞转染实验常见的几个陷阱,望实验人员能够注意。 1.准备不足 做细胞转染的时候,在开展正式实验前要多做预试验,优化转染条件。优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。 2.细 …

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电转染实验,如何设置正确的siRNA实验对照组?

1.设置空白对照组,检验细胞生长状态。 2.设置阴性对照组,无血清培养基 + Entranster-E 电转染试剂 + 阴性siRNA。 3.设置阳性对照组,无血清培养基 + Entranster-E 电转染试剂+ 靶向siRNA 转染管家基因,比如GAPDH 或者 Lamin A/C,之后通过western blotting 或者 mRNA quantif …

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如何利用好慢病毒感染的原理和特点?

一、原理 慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体,与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通 siRNA 载体相比,一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用,另一方面,Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非 …

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细胞电转染效率不高的原因是什么?

细胞电转染效率不高,有可能是以下原因造成的: 1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2 …

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