英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
培养细胞后，要时刻观察我们的细胞，无论是用眼睛还是显微镜观察，我们要了解他们的状态，每个实验的培养条件不同，只有时刻了解他们，及时调整，才能做好后续实验。 划重点: 必须熟悉培养的细胞的正常形态，每当拿到一个新的细胞株时，要尽可能多的观察并熟悉细胞的正常生长情况。 当我们从培养箱中拿出细胞培养瓶时: 1.注意看培养基的颜色。多数培养基中都有酸碱指示剂，偏酸性 …
阅读更多 »实验室小白篇：细胞培养用的液体
一、细胞培养所需的培养液 在细胞的研究和利用过程中，最主要的是要为细胞提供最适的生长条件，保持细胞培养开始时的群体状态。这就要求培养条件始终如一，近乎呆板地坚守细节和常规，而且细胞培养，试剂昂贵，费时、费力，不是随随便便就可以进行的。 细胞只有在最适生长条件下，才会保持正常的核型及功能。如果培养条件上打折扣，就意味着会出现带有染色体重排或突变变异株细胞。某些 …
阅读更多 »细胞污染的心得体会
细胞培养的质量好坏是细胞相关实验的基石，许多朋友都曾经历过因为细胞污染影响实验进度的郁闷，被老板批评是小事，要是影响到正常毕业就是大事了。怎么分辨细胞污染，是不是细胞污染？是那种细胞污染？细胞污染后如何处理？ 预防污染 细胞培养是个细致活儿，一不小心就会造成污染，最好养成良好无菌操作习惯。个人经验是，进实验室之前最好洗手，很多实验者都不bother，这是国人 …
阅读更多 »体外培养细胞的一般性质（一）
细胞的存活及生长具有贴壁依赖性 绝大多数实体组织来源的细胞，在离开机体、于体外生存生长时，都具有贴壁依赖性，即以单层形式附着在培养瓶或培养皿表面的方式生长。如果无法贴壁（如接种细胞过多、总被摇动等），则细胞将会死亡。从组织中分离出来的细胞或传代后的细胞，首先黏附于培养界面，在界面上铺展，然后才开始分裂、增殖。 细胞的黏附是通过特异的细胞表面受体与细胞外基质分 …
阅读更多 »血清对于细胞转染效率有什么影响？
血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附，影响转染效率。另外，使用脂质体等转染试剂时，由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞，引发细胞毒性，导致转染效率降低，故不能有血清转染。这些转染试剂要求在转染前换无血清培养基，转染后4-6h在更换成有 …
阅读更多 »Hela细胞转染后死亡是什么原因？
可能有多种原因： 目标蛋白对细胞有毒性，导致细胞死亡； 转染试剂以及DNA用量信息需要优化，否则对细胞具有伤害； 细胞贴壁转染之后没有正常换液。 建议： 考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统； 摸索转染试剂以及DNA用量信息，如果转染试剂毒性太大，可以考虑尝试Entranster转染试剂。 对转染后的细胞进行换液处理，如果细胞状态感觉不够理想，可以考 …
阅读更多 »如何做好细胞转染实验？
1．选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的 …
阅读更多 »RNA转染注意事项
为保证RNA转染的高效率，在转染过程中应注意： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境 …
阅读更多 »细胞生长缓慢的原因分析
开始培养细胞后，就恨不得写好每一天的进度计划，甚至连出成果那天的日期都预估好，然而，生活总是充满了意外…… 我的细胞，你为啥长的这么慢呢？？究其原因，真是丰富多彩…… 如果整个实验室只有你一个人遇到这个问题…… 1. 检査你所培养的细胞是否存在污染。 (a)如果培养细胞未添加抗生素（必须添加！），细胞污染则是不可避免的。 (b) 检测可能污染的途径和原因（无 …
阅读更多 »悬浮细胞的分瓶操作步骤
悬浮细胞的分瓶 轻轻的摇匀培养瓶中的细胞培养物，吸出1 ml 到微量离心管中。 对细胞进行计数，同时观察细胞状态。 计算出稀释倍数，决定种子液的量。 吸出适量的细胞到新的培养瓶中。 加入适量的37°C 预热的新培养基。 把细胞放入培养箱，并把盖子松开。 继续培养母液培养物，不加入新的培养基。注意每次传代后都要保留原液作为备份，以防传代后的细胞被污染。在培养瓶 …
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