英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
RNA转染试剂Entranster-R4000使用过程中常见问题及解决方案如下：
阅读更多 »siRNA细胞转染效率低下的原因
1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这 …
阅读更多 »调控红细胞脱核机制研究
标题 The accumulation of miR-125b-5p is indispensable for efficient erythroblast enucleation 影响因子 该论文发表在《Cell Death and Disease》期刊上，2022年的影响因子为9.0，属于细胞生物学和医学领域的权威期刊。 文献概要 该研究探讨了miR-1 …
阅读更多 »使用带有GFP荧光标记的慢病毒感染细胞，想要检测GFP阳性率，通常用什么方法？
如果您使用的是带有GFP荧光标记的慢病毒感染细胞，想要检测GFP阳性率，通常情况下可以通过流式细胞仪来实现，步骤如下： 收集细胞：首先收集感染后的细胞，并用适当的缓冲液进行重悬。 去除死细胞：可以通过加PI（碘化丙啶）或7-AAD等染料来排除死细胞，这样有助于提高检测的准确性。 流式检测：使用流式细胞仪时，选择FITC通道（通常是FL1通道），因为GFP的荧 …
阅读更多 »细胞的支原体检测——扫描电子显微镜法
（一）原理 利用电子显微镜的超级放大功能， 直接观察培养细胞中支原体污染情况。 （二）材料与设备 待检测细胞， 0.05％胰蛋白酶／0.02%EDTA 、2.5％的戊二酸、1％饿酸、0.1mol/L磷酸缓冲溶液（ pH7.4 ) ，扫描电镜及相关设备。 （ 三）操作步骤 1. 将待检测细胞传代至贴有盖玻片的培养皿中。2. 37°C , CO2 培养箱中培养2 …
阅读更多 »双质粒共转染哺乳动物细胞，出现其中一个质粒表达量降低，而另一个质粒表达正常的情况，原因和解决办法
可能的原因： 质粒竞争效应： 在共转染过程中，两个质粒可能在转染效率、复制能力或表达资源（如转录因子和核糖体）上竞争。一个质粒可能因此受到抑制，导致其表达量下降。 解决方法： 提高低表达质粒的比例，例如2:1或更高。 尝试使用等摩尔浓度（而非等质量浓度）的质粒来转染。 质粒质量或纯度差异： 低表达质粒可能存在降解、污染或纯化不完全的问题，从而影响其转染效率或 …
阅读更多 »哺乳动物细胞同时表达2个质粒，如果采用相同的启动子，会不会形成表达竞争
是的，如果哺乳动物细胞同时表达两个质粒，且这两个质粒使用相同的启动子，它们可能会发生表达竞争（expression competition）。这种情况通常会影响两个质粒上基因的表达水平，具体影响程度取决于多个因素。 原因 转录因子的竞争： 启动子区域的转录因子结合位点是有限的。如果两个质粒使用相同的启动子，它们可能会争夺同一批转录因子。这种竞争会导致转录因子 …
阅读更多 »如何分离成纤维细胞？
下述的通用操作方案适用于小鼠、大鼠、仓鼠和鸡胚胎。选择大约一半足孕时间的胚胎最好，10 ~ 13 天龄胚胎含有最大数量的未分化的间质细胞，成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。 胚胎的分离 适用哺乳动物（仓鼠、小鼠和大鼠） 采用认可的方案处死啮齿动物 立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。若可能，置紫外灯下照射5分钟 用无齿的摄子和剪子在前腿下作一腹部水平切 …
阅读更多 »不同类型细胞的生长形态
贴壁细胞 正常情况下观察到的细胞应该是规则均匀分布在培养皿底面上的一层细胞。每种细胞都有其自身的形态特征：球形、三角形、方形、长形等等。细胞的生长方式有些像鹅卵石铺成的路面、有些呈液涡状、有些是随机形态、而有些则覆盖了另一些细胞。 在单个细胞中能够发现一个比较暗的圆形细胞核，其内还有更暗的核仁。有时核仁大得把细胞质挤成很小的一块。分裂时期细胞核可能成半球状或 …
阅读更多 »怎么样做好siRNA细胞转染实验？
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …
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