英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度 2. 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛，表面结构 …
阅读更多 »Hela细胞转染后死亡是什么原因？
可能有多种原因： 目标蛋白对细胞有毒性，导致细胞死亡； 转染试剂以及DNA用量信息需要优化，否则对细胞具有伤害； 细胞贴壁转染之后没有正常换液。 建议： 考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统； 摸索转染试剂以及DNA用量信息，如果转染试剂毒性太大，可以考虑尝试Entranster转染试剂。 对转染后的细胞进行换液处理，如果细胞状态感觉不够理想，可以考 …
阅读更多 »通过alamarBlue 法分析细胞活力
水溶性染料 alamarBlue 已用于体外定量多种类型细胞的活力( Fields and Lancaster 1993; Ahmed et al. 1994 ) 。该试剂极其稳定且无毒，因此可用于长时间连续监测细胞( Ahmed et al. 1994 ) 。基于上述原因， alamarBlue法被认为优于MTT 检测等经典的细胞活力检测方法。在一个比较实 …
阅读更多 »293T分别包装两种病毒，浓缩后混合感染鼠CD8+ T细胞可以吗？
原则上可以，具体要看以下几个条件： 步骤可行性： 分别包装：在293T细胞中分别转染两种构建（比如psPAX2 + pMD2.G + 各自的载体），收集病毒上清； 浓缩：超速离心或PEG浓缩，两种病毒分别处理； 混合感染：感染前混合两种浓缩后的病毒，用于感染小鼠CD8+ T细胞。 技术要点： T细胞激活：CD8+ T细胞对逆转录病毒天然不易感染，通常需要先用 …
阅读更多 »细胞生长缓慢的原因分析
开始培养细胞后，就恨不得写好每一天的进度计划，甚至连出成果那天的日期都预估好，然而，生活总是充满了意外…… 我的细胞，你为啥长的这么慢呢？？究其原因，真是丰富多彩…… 如果整个实验室只有你一个人遇到这个问题…… 1. 检査你所培养的细胞是否存在污染。 (a)如果培养细胞未添加抗生素（必须添加！），细胞污染则是不可避免的。 (b) 检测可能污染的途径和原因（无 …
阅读更多 »双质粒表达系统，如何选择启动子?
1. 使用不同的启动子：为两个质粒选择不同类型的启动子，避免它们之间的竞争 这个建议是针对以下情况的： 启动子竞争效应：如果两个质粒使用相同或类似的启动子，尤其是强启动子（例如，CMV启动子），它们可能会争夺有限的转录因子和转录机制资源（如RNA聚合酶）。这种情况下，启动子竞争可能导致一个质粒的表达被抑制，从而影响另一个质粒的表达。 例如，如果两个质粒都使用 …
阅读更多 »人外周血B 淋巴细胞的转化
EB 病毒的特性之一是能使人外周血B 淋巴细胞转化，使其成为连续分裂，永久生存的类淋巴母细胞样细胞，即永生化细胞。每一永生细胞株都保存了原来提供血样个体的完整基因组，为研究世界上不同人种、不同民族的遗传结构，不同个体、不同人群对疾病的易感性，特别是对家族性遗传疾病和地方性疾病的易感性，提供了宝贵的遗传资源。 （一）材料与设备 1. 无菌材料 细胞培养瓶T …
阅读更多 »嘌呤霉素筛选标记的病毒滴定 Protocol
关于使用嘌呤霉素筛选标记的慢病毒或逆转录病毒进行病毒滴定的 protocol，整理了一个常用且较为权威适用于慢病毒系统： 【嘌呤霉素筛选法的病毒滴定 Protocol】 原理简述： 将病毒感染宿主细胞，使用嘌呤霉素筛选，仅有成功整合了抗性基因的细胞能存活。最后通过计数存活细胞（克隆或整体密度）来估算病毒滴度。 实验材料： 病毒上清； HEK293T 或其他易 …
阅读更多 »siRNA转染进细胞有哪些方法？
siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术（Entranster）是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好 …
阅读更多 »细胞培养该不该加抗生素?
细胞有没有正常生长，或细胞是否污染，是细胞培养的关键。虽然，顺利的时候，细胞培养起来很简单，可不顺的时候就会出现各种问题——-细胞污染啦、细胞生长缓慢啦、细胞形态看着不对劲啦、死细胞率多啦。。。。。。。。毕竟，细胞作为一种体外培养的物质，受许多外界因素的影响，培养基、血清、孵育温度，CO2浓度。。。。。。除此之外，还有一种影响因素就是 …
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