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细胞转染为什么不能加血清?

看过很多细胞转染的高手,在做真核细胞转染时,都是在把核酸和转染试剂的混合液加入细胞表面以前,将融合的细胞的含血清的培养液弃去,用无血清培养基清晰后再加入混合物,4-6h后再换含血清的培养基。这是为什么呢?为什么这些转染试剂要求不含血清呢?

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传统的转染试剂有一定的细胞毒性,在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如,阳离子脂质体。带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。血清中含有大量的蛋白质,在转染过程中,带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附,影响转染效率。另外,使用脂质体等转染试剂时,由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞,引发细胞毒性,导致转染效率降低,故不能有血清转染。这些转染试剂要求在转染前换无血清培养基,转染后4-6h在更换成有血清培养基,这其实是为了减轻转染造成的细胞毒性。

 

不同的细胞及转染试剂要求转染的条件是不同的。最好是在第一次实验前做一个预实验,比如:HeLa,293,CHO,COS7, MCF-7,HepG2等细胞,是否加血清,对不同的细胞是有不同的影响的,有些细胞是可以有血清的,有些加血清就会受影响。所以,普通的转染试剂一定要进行预实验,和条件优化。

 

转染后在6小时左右最好换液且换为有血清的培养基,其一因为普通转染试剂对细胞的毒性作用大,其二可降低因血清的缺乏引起的细胞的死亡。转染时不加血清是防止血清的干扰作用,转染后可适时加入。加入过早会引起未转染细胞的优势生长,过晚会引起较多细胞死亡。可实时观察1/5细胞变圆的时候加入血清。

 

现在市面上也有一些改进了的转染试剂,可以在转染时含有血清;也有一些公司完全改变了产品性质,使转染过程更加简便,效率更高。如,英格恩公司的EntransterTM只浓缩包裹核酸不会将血清带入细胞。EntransterTM采用有血清转染,不用在有血清和无血清之间更换,增加工作量,同时有血清转染不仅不造成细胞毒性,而且由于血清的存在,有利于细胞的状态维护,提高转染效率。

 

由于EntransterTM的内毒素和细胞毒性都非常之低,加上转染复合物能够高效的在完全培养基中形成,因而整个转染过程可以在含血清而且是含有抗生素的培养基中操作,无需更换培养基,这极大的方便转染操作!适用于包括干细胞,神经细胞,原代细胞和其他方法难转染细胞的转染在内的多种真核细胞。

 

细胞毒性的大小往往意味着对细胞生理活动影响的大小。这会对相关研究数据产生严重的干扰,甚至影响研究的结论。因此,选择一种高效方便的转染试剂是细胞转染成功的关键。

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