首先siRNA由于只 …
阅读更多 »使用AUTOMACS 系统进行B 细胞的自动分选
材料 小鼠 HBSS 洗涤缓冲液 MACS 缓冲液 CD45R(B220) 磁珠 RPMI-10 完全培养基 autoMACS 系统和分选柱 30μm 尼龙网(BD) 或40μm 预分离滤膜 步骤 用2 只小鼠的脾脏制备单细胞悬液并去除红细胞。 将细胞在10ml HBSS 洗涤缓冲液中混悬后用血细胞计数器计数 。 将细胞悬液在4℃,200g 离心10 min …
阅读更多 »Q1: 一个孔中应接 …
阅读更多 »免疫共沉淀:当细胞在 …
阅读更多 »材料 小鼠 HBSS 洗涤缓冲液 MACS 缓冲液 CD45R(B220) 磁珠 RPMI-10 完全培养基 autoMACS 系统和分选柱 30μm 尼龙网(BD) 或40μm 预分离滤膜 步骤 用2 只小鼠的脾脏制备单细胞悬液并去除红细胞。 将细胞在10ml HBSS 洗涤缓冲液中混悬后用血细胞计数器计数 。 将细胞悬液在4℃,200g 离心10 min …
阅读更多 »材料 小鼠 HBSS 洗涤缓冲液 MACS 缓冲液 磁珠 RPMI-10 完全培养基 autoMACS 系统和分选柱 30μm 尼龙网或40μm预分离滤膜 步骤 用 5 只小鼠的淋巴结或 2 只小鼠的脾脏制备单细胞悬液并去除红细胞 。 将细胞在10ml HBSS 洗涤缓冲液中混悬后用血细胞计数器计数 。 将细胞悬液在4℃,200g 离心10 min。弃上清后 …
阅读更多 »材料 RPMI-5 或DMEM-5 完全培养基 新鲜分离的小鼠器官: ≤6 周龄的小鼠胸腺; 6 周至6 个月龄的小鼠脾脏和淋巴结 60mmX15mm 培养皿 剪刀和镊子(保存在70 %乙醇的烧杯中) 装有19G 针头的6ml 注射器 200μm 尼龙滤网 步骤 将新鲜分离的器官放入盛有3ml RPMT-5 或DMEM-5 完全培养基的60mmX15mm培 …
阅读更多 »基本方案4 胃蛋白酶水解IgG 获取F (ab’)2 片段的大量制备 材料 ≥1mg/ ml 纯化的IgG 适当pH 的乙酸缓冲液 : 0. 2mol/L 乙酸钠,用冰乙酸调至所需pH 2mol/L Tris 碱 PBS, pH8.0 蛋白A 交联琼脂糖凝胶CL-4B 半胱氨酸,可选 碘乙酰胺结晶,可选 聚丙烯酰胺葡聚糖S-200 Super …
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