2024年 5月 18日, 星期六
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如何构建siRNA表达载体?

siRNA表达载体构建可以:(1)作为后基因组时代基因功能分析的有力工具;(2)应用于基因组学、细胞信号传导通路分析;(3)用于药物靶点筛选、疾病治疗。 实验方法原理: 多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种,操纵一段小的发夹RNA(shorthairpinRNA, shRNA)在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动 …

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为什么CRISPR没有成为目前基因治疗的首选技术?

CRISPR的热度在分子生物界持续了数年,而2020年的诺贝尔化学奖授予给了两位CRISPR的奠基者,更是将CRISPR的研究热潮推上了顶峰。 CRISPR实际是(clustered regularlyinterspaced short palindromic repeats,成簇的有规律的间隔短回文片段)的简称。 1987年,科学家在大肠杆菌中发现了一段“ …

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siRNA转染答疑专题总结(下)

Q9: 刚开始做实验,准备把RNAi的片段转入染色体内稳定表达,不知道是shRNA还是siRNA哪个比较好而且效率比较高?另外,一个载体里同时放两个针对不同基因的shRNA会不会相互影响? A9: 稳定转染当然是shRNA。关于一个载体2个shRNA,涉及到2个shRNA的表达和加工的问题,关键还是2个shRNA都需要顺利表达的问题,这就和你的载体,以及2个 …

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